Регистрация / Вход
Прислать материал

Разработка бифункциональных агентов на основе рекомбинантных белков суперсемейства иммуноглобулинов и лигандов поверхностных рецепторов патологических лимфоцитов для направленной терапии лимфопролиферативных и аутоиммунных заболеваний

Докладчик: Белогуров Алексей Анатольевич

Должность: старший научный сотрудник, кандидат химических наук

Цель проекта:
Разработка и получение бифункциональных агентов белковой природы для направленной элиминации патологических лимфоцитов при рассеянном склерозе и лимфомах, на основе: (1) генно-инженерных фрагментов антигенов, фрагментов белков суперсемейства иммуноглобулинов, химических пептидомиметиков, (2) Т-клеток, трансфицированных химерными рекомбинантными антигенными рецепторами высокой специфичности (CAR). Апробация технологии на мышиных моделях аутоиммунных и онкологических заболеваний.

Основные планируемые результаты проекта:
В ходе выполнения ПНИ будут получены следующие продукты:
i. MBP84-106-Fc – бифункциональный агент на основе рекомбинантного Fc, слитного с иммунодоминантным фрагментом основного белка миелина человека (MBP84-106);
ii. MBP147-170-Fc – бифункциональный агент на основе рекомбинантного Fc, слитного с иммунодоминантным фрагментом основного белка миелина человека (MBP147-170)
iii. MOG35-55-Fc – бифункциональный агент на основе рекомбинантного константного фрагмента иммуноглобулина человека (Fc), слитного с иммунодоминантным фрагментом миелин-олигодендроцитарного гликопротеина человека;
iv. AMogP3-Fc – бифункциональный агент на основе рекомбинантного Fc, химически конъюгированного с пептоидом, взаимодействующим с В-клеточным рецептором аутореактивных лимфоцитов;
v. MBP84-106-CARIII – бифункциональный агент на основе иммунодоминантного фрагмента основного белка миелина человека (MBP84-106) и химерного антигенного рецептора Т-клеток третьего поколения (CARIII);
vi. MBP147-170-CARIII бифункциональный агент на основе иммунодоминантного фрагмента основного белка миелина (MBP147-170) и химерного антигенного рецептора Т-клеток третьего поколения (CARIII);
vii. MBP84-106-HLA_DR2b-CARIII – бифункциональный агент на основе MBP84-106 в составе молекулы главного комплекса гистосовместимости, ассоциированного с патологией рассеянного склероза (РС), (ГКГС, HLA_DR2b) и химерного антигенного рецептора Т-клеток третьего поколения (CARIII);
viii. MBP147-170-HLA_DR2b-CARIII бифункциональный агент на основе MBP147-170 в составе HLA_DR2b, и химерного антигенного рецептора Т-клеток третьего поколения (CARIII);
ix. TCR_Ob1.A12-CARIII бифункциональный агент на основе Т-клеточного рецептора Ob1.A12, ассоциированного с патологией РС, и химерного антигенного рецептора Т-клеток третьего поколения (CARIII);
x. Lymphpep7aaLig-CARIII бифункциональный агент на основе специфического лиганда В-клеточных рецепторов лимфомных клеток различной этиологии и химерного антигенного рецептора Т-клеток третьего поколения (CARIII).
Продукты (i-iv) предназначены для направленной элиминации патологических лимфоцитов за счет антитело-зависимой цитотоксичности и комплемент-зависимого лизиса.
Продукты (v-x) предназначены для направленной элиминации патологических лимфоцитов трансплантацией аутологичных Т-клеток, предварительно модифицированных ex vivo специфическими химерными антигенными рецепторами.
Молекулы Fc домена иммуноглобулина человека, слитного c фрагментами MBP84-106, MBP147-170 и MOG35-55 будут созданы на основе коммерчески доступного плазмидного вектора pFUSE (Invivogen). Создание CAR планируется с использованием лентивирусной системы экспрессии. Для выполнения поставленной задачи на основе химерного антигенного рецептора Т-клеток будет создан CAR III поколения, в который, для увеличения эффективности активации Т-лимфоцитов, будут введены сигнальные компоненты трех различных белков Т-клеток: трансмембранный и цитоплазматический домен CD28; цитоплазматический домен OX-40; цитоплазматический домен CD3ζ. Для проведения направленной элиминации аутореактивных В-лимфоцитов, в состав химерного рецептора будут введены фрагменты MBP84-106 и MBP147-170 .
Плазмидные вектора, кодирующие химерные антигенные рецепторы Т-клеток, будут использованы для трансфекции эукариотических клеток и последующей наработки лентивирусов, способных модифицировать Т-клетки. Все полученные препараты будут охарактеризованы с точки зрения их физико-химических, структурных и функциональных свойств. В качестве животной модели РС нами будет использован экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЕАЕ), индуцированный у генетически модифицированных мышей DBA/2xC57BL/6HLA–DR2b/TCR–Ob.1A12. Эффективность бифункциональных агентов будет определена с помощью проточной цитофлуориметрии по уровню элиминации популяции патологических лимфоцитов и фактору избирательности (ESF).


Назначение и область применения, эффекты от внедрения результатов проекта:
Областью применения результатов ПНИ является фундаментальная медицина. При проведении ряда организационно-практических мероприятий областью применения может стать практическое здравоохранение РФ. При получении положительных тестов in vivo в рамках предложенной программы исследований целесообразно будет приступить к комплексу доклинических испытаний, в частности на базе центра по доклиническим испытаниям филиала ИБХ РАН в г. Пущино, МО. При получении положительных результатов в рамках данной программы на пост-проектном этапе необходимо будет провести работу по оформлению регистрационных досье, плана клинических испытаний, включая набор центров по прохождению клинических испытаний, и сдать документы на оформление в Минздрав РФ. При получении положительных решений на клинические испытания организовать выпуск препаратов с участием индустриального партнера. Получаемыми в данном ПНИ результатами могут воспользоваться Академические учреждения и учреждения Высшего образования РФ химического, биологического и медицинского профиля, фармкомпании и холдинги РФ, занимающиеся разработкой и внедрением высокотехнологичной биомедицинской продукции. Результаты ПНИ могут быть использованы в дальнейших разработках ИБХ РАН, ИМБ РАН, ИНБИ РАН, ИМГ РАН, ЦИН РАН, ИБГ РАН, Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина (Москва), Институт ревматологии имени В. А. Насоновой (Москва), ФГБУ "НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова" (Санкт-Петербург). Результаты могут быть востребованы на химическом и биологическом факультетах МГУ, на факультете фундаментальной медицины МГУ. Компании «Фармстандарт», «Химрар», «Биокат», «Генериум». Разрабатываемые новые генно-инженерные модули и модифицированные Т клетки могут стать прообразом других подобных разработок и могут быть важны для продвижения фундаментальных основ одного из новых направлений современной биофармацевтики. Практическим конечным потребителем перечисленных выше продуктов будет являться индустриальный партнер проекта –Компания ОАО «Фармсинтез», Санкт-Петербург.

Текущие результаты проекта:
Текущими результатами проекта являются: аналитический обзор современной литературы, посвященной направленной элиминиации патологических клеток; патентные исследования; план проведения исследований по созданию адресных бифункциональных агентов с терапевтическим потенциалом; генетические конструкции для экспрессии генов бифункциональных агентов для направленной элиминации патологических лимфоцитов при рассеянном склерозе и лимфоме.