Регистрация / Вход
Прислать материал

Создание персонифицированных препаратов на основе цитотоксических Т-лимфоцитов и дендритно-клеточных вакцин для профилактики и терапии рецидивов злокачественных новообразований

Номер контракта: 14.607.21.0140

Руководитель: Фролова Елена Ивановна

Должность: заведущий Группой экспрессии белковых факторов роста и дифференцировки

Аннотация скачать
Постер скачать
Ключевые слова:
адоптивная иммунотерапия, дендритноклеточные вакцины, цитотоксические т-лимфоциты, персонализированная медицина, иммунотерапия онкопатологии, экспрессия опухолевых антигенов, экспансия моноцитов из периферической крови, лентивирусная доставка в дендритные клетки, лентивирусные векторы, парамиксовирусные векторы, тканеспецифичные промоторы, локализация на комплексах гистосовместимости

Цель проекта:
Разработка нового подхода к адоптивной иммунотерапии с целью предотвращения развития рецидивов злокачественных новообразований путем формирования специфического противоопухолевого иммунитета. Ожидаемым эффектом от появления и применения такого подхода является снижение частоты рецидивов опухолей и увеличение выживаемости после проведения операции, а в конечном итоге - сокращение доли онкологических заболеваний как причины смертности населения. Создание комплекса ДНК-конструкций, нацеленных на проведение адоптивной иммунотерапии пациенов со злокачественными новообразованиями для формирования специфического противоопухолевого иммунитета. Создание, поддержание и пополнение коллекции экспрессируемых опухолевых антигенов для быстрого получения антиген-специфичных дендритноклеточных популяций, эффективно действующих против широкого спектра опухолей. Получение научных результатов, позволяющих проводить дальнейшее совершенствование иммунотерапевтических подходов с использованием дендритноклеточных вакцин и опухолеспецифических цитотоксических Т-лимфоцитов. Одним из наиболее предпочтительных эффектов будет развитие подходов, связанных с дальнейшей модификацией активированных дендритными клетками цитотоксических Т-лимфоцитов для повышения их противоопухолевой активности и более эффективного поддержания противоопухолевых клеток памяти.

Основные планируемые результаты проекта:
Разработка и испытание оптимального способа получения дендритных клеток из периферической крови, включающего в себя описание процедуры экспансии моноцитарной фракции ex vivo за счет введения стимулирующих пролиферацию конструкций, описание оптимальных условий культивации CD14+ моноцитов для дифференцировки в дендритные клетки с использованием экзогенных цитокинов или трансдукции экспрессирующими векторными частицами.

Оценка эффективности действия различных носителей на основе рекомбинантных вирусных векторов для доставки ДНК-конструкций в дендритные клетки. Носители на основе лентивирусов будут модифицированы для более эффективной трансдукции дендритных клеток и более направленной доставки трансгена при помощи вирусного белка Vpx и псевдотипирования поверхностными гликопротеинами, обладающими специфичностью в отношении дендритных клеток.
Оптимизация уровней экспрессии и представленности на белках комплекса гистосовместимости MHC классов I и II опухолевых антигенов в дендритных клетках путем проверки эффективности действия ряда промоторов и сигналов лизосомной деградации. Полученный в результате конструкт будет осуществлять сильную и стабильную по времени экспрессию антигена в дендритных клетках, с представлением антигенных эпитопов на MHC классов I и II, что позволит получать большие количества активированных CD8+ и CD4+ цитотоксических лимфоцитов для формирования комплексного противоопухолевого иммунитета.

Будет найден оптимизированный способ получения цитотоксических Т-лимфоцитов in vitro, отработаны условия очистки фракции Т-лимфоцитов из периферической крови, их ко-культивации совместно со зрелыми дендритными клетками, приводящие к образованию максимально большого количества Т-лимфоцитов, характеризующихся сохраненной цитотоксичностью в отношении опухолевых клеток.
Получение данных о возможности использования цитотоксических Т-лимфоцитов для направленной доставки в опухоль белковых терапевтических агентов, обладающих избирательным противоопухолевым действием.
 Разработка подхода по выявлению новых опухолеспецифичных антигенов при помощи глубокого секвенирования транскриптома и высокопроизводительной масс-спектрометрии.

Краткая характеристика создаваемой/созданной научной (научно-технической, инновационной) продукции:
Основной результат предлагаемого проекта – дендритно-клеточная противоопухолевая вакцина, полученная путем оптимизированной культивации дендритных клеток, введения в них конструкций, экспрессирующих опухолевые антигены и получения при помощи ко-культивации с ними больших количеств активированных Т-лимфоцитов, обладающих противоопухолевой активностью in vivo, и обеспечивающих комплексную иммунную реакцию с образованием долгоживущих противоопухолевых клеток памяти.

Назначение и область применения, эффекты от внедрения результатов проекта:
Разработанная дендритно-клеточная противоопухолевая вакцина может быть применена для лечения широкого спектра аденокарцином различной этиологии, причем максимальная эффективность ожидается в качестве средства терапии рецидивов опухолей. Выполнение проекта приведет к формированию метода, максимально готового к внедрению в клиническую практику, применение которого в конечном итоге послужит снижению смертности от онкологических заболеваний, увеличению выживаемости и показателей успешности противораковой терапии. Отличительной особенностью терапевтического метода на основе адоптивной иммунотерапии является возможность его использования совместно с традиционными методиками терапии онкопатологий – химио- и радиотерапией.
Данные о возможностях использования цитотоксических Т-лимфоцитов для направленной доставки в опухоль белковых терапевтических агентов могут послужить основой для разработки новых, более эффективных комплексных подходов к терапии злокачественных опухолей и дать начало широкому применению в медицине терапевтических средств на основе белковых молекул.
Описанный в ходе проекта подход по выявлению новых опухолеспецифичных антигенов при помощи высокопроизводительного секвенирования и масс-спектрометрии с последующей их экспрессией в дендритных клетках, в частности, послужит созданию централизованного репозитория, содержащего готовые экспрессионные конструкты для широкого спектра опухолевых антигенов, что приведет к прогрессивным сдвигам в области персонализированной медицины.
В целом, предполагается, что созданный в ходе выполнения проекта научно-технический задел приведет к более широкому внедрению в медицинскую практику продвинутых методов иммунотерапии опухолей, в частности, адоптивной иммунотерапии с использованием цитотоксических Т-лимфоцитов, а также создаст предпосылки для появления нового поколения высокоэффективных иммунотерапевтических подходов, основанные на полученных в ходе проекта данных.

Текущие результаты проекта:
Были выполнены теоретические работы – проведен обзор научно-технической и нормативной литературы, проведены предварительные патентные исследования.
Разработаны схемы получения ДНК-конструкций, кодирующих эпитопы опухоль-ассоциированных антигенов (ОАА), способных к эффективной стимуляции противоопухолевого иммунного ответа, проведены генно-инженерные работы и получены экспериментальные образы ДНК-конструкций в количестве, достаточном для проведения дальнейших исследований.