Регистрация / Вход
Прислать материал

Генетика ревматоидного артрита как модели системного аутоиммунного полигенного заболевания.

Тема
Генетика ревматоидного артрита как модели системного аутоиммунного полигенного заболевания.
Авторы
Гусева И.А., Демидова Н.В., Лучихина Е.Л., Сорока Н.Е., Александрова Е.Н., Новиков А.А., Авдеева Н.С., Абрамов Д.Д., Трофимов Д.Ю., Каратеев Д.Е., Насонов Е.Л.
Ключевые слова
Ревматоидный артрит, однонуклеотидный полиморфизм, аллели HLA-DRB1, антитела к циклическим цитруллинированным пептидам
Введение
Ревматоидный артрит (РА) - хроническое системное воспалительное заболевание соединительной ткани, характеризующееся деструктивным поражением суставов, в патогенезе которого значительную роль играют аутоиммунные механизмы. РА относится к большой групп мультифакториальных, полигенных заболеваний, которые характеризуются вовлеченностью в формирование предрасположенности к болезни и выраженный клинический полиморфизм многих генов.
Цель
Оценить роль генетических маркеров в формировании: 1) предрасположенности к развитию РА; 2) клинико-иммунологической гетерогенности; 3) прогноза течения РА; 4) эффективности терапии базисными противовоспалительными препаратами (БПВП) и генноо-инженерными препаратами (ГИБП).
Материалы и методы

 Исследование   проведено   на  выборке  550  пациентов  РА  с различными клинико-иммунологическими формами РА и 300 практически  здоровых лиц  контрольной  группы.  Все  индивиды, вошедшие в исследование,   идентифицировали себя как «русские» и проживали в Москве и Московской  области.  Для  идентификации  генетических маркеров  (ген HLA -DRB1 + 14 однонуклеотидных полиморфизмов , SNPs ), потенциально ассоциированных  с риском  развития РА, проведено  исследование  «случай -контроль»     на материале   300  больных  ранним РА (РРА)   и  300 лиц контроля.   Анализ   взаимосвязи   «генотип   -  фенотип»   и прогноза заболевания  проведен в выборке больных с РРА (330 человек) с длительностью заболевания на момент включения не более 2-х лет  в   2-4 летнем проспективном исследовании   с  динамическим   клинико -лабораторным   и  инструментальным   обследованием  в нескольких временных точках. Группа из 220 больных с различными тяжелыми формами РА (прогрессирование деструктивного поражения суставов, персистирующая высокая активность заболевания несмотря на проводимое лечение и т.д.) служили для валидации полученных результатов из проспективного исследования. Эффективность терапии во взаимосвязи с генетическими маркерами оценена у 300 пациентов РА. Генотипирование полиморфизмов генов PTPN22+1858C/T, CTLA4 +49A/G, IL-6-174G/C, IL-6R +358A/C, TNF-α-308A/G, TNFAIP3 T/C  (rs6920220, TNFAIP3 A/G (rs10499194, MCP-1+258 A/G,  IL-10 -592A/C, -1082A/G, IL1A C/T, IL1B C/T,  MTHFR +677С/T, +1298A/C  проводили  методом ПЦР в режиме реального времени с использованием флюорес­центно-меченных специфичных гибридизационных праймеров с последующей автоматической оценкой кривых температур плавления на  амплификаторе ДТ-96 (ЗАО «НПФ ДНК-Технология», Россия).  Высокоразрешающее генотипирование аллелей DRB1 (секвенирование ) осуществлено на секвенаторе 3130I Genetic Analyzer (Applied Biosystems).

 

 

Результаты

Среди изученных генетических маркеров аллели генов HLA-DRB1, PTPN22TNFAIP3  были ассоциированы с развитием РРА. Ассоциативная взаимосвязь была более выраженной в подгруппе АЦЦП-позитиных пациентов. Полиморфизмы генов CTLA4 +49A/G, IL-6R +358A/C, IL-10 -592A/C, -1082A/G были ассоциированы с РРА с высокой воспалительной активностью (СРБ =40,5±42,4 мг/л) при включении в исследование. Наиболее значимыми генетическими маркерами чувствительности к  РА являлись аллели гена HLA-DRB1, относящиеся к SE (Shared Epitope) (*0101, *0102,*0401, *0404, *0405, *0408, *10) (хотя бы один аллель SE: OR=4,1, p<1х10-8; двойной набор аллелей SE: OR=6,2, р<1х10-6), и  аллель T гена PTPN22 (OR=1,9,  р<4х10-5), особенно, в гомозиготном состоянии (OR=4,9, p<0,005). При РРА детально изучена генетическая детерминация аллелями гена HLA-DRB1 продукции прогностически неблагоприятных иммунологических маркеров АЦЦП и  IgM РФ. Сравнение низко- и высокоразрешающего методов олиготипирования аллелей HLA-DRB1 позволило установить более высокую информативность высокоразрешающе го олиготипирования. Выделены аллели риска и протекции РА, которые тесно ассоциированы с высокой и низкой продукцией АЦЦП, но не с уровнем продукции IgM РФ. Полученные данные могут свидетельствовать о различных аутоиммунных механизмах патогенеза РА.

 Логистический регрессионный анализ показал, что среди изученных генетических маркеров аллели SE, особенно в сочетании с АЦЦП (антитела к циклическим цитруллинированным пептидам), являются предикторами прогрессирования эрозивного процесса в суставах в течение первых двух лет проспективного наблюдения больных с ранним РА. Через 4 года наблюдения прогрессирование деструкции суставов было ассоциировано с полиморфизмом гена MTHFR +677С/T. Выявлена взаимосвязь полиморфизмов генов CTLA4 +49A/G, PTPN22+1858C/T, MCP-1+258 A/G и IL-6-174G/C с серологическими и клиническими маркерами воспаления (СОЭ, СРБ, число болезненных и припухших суставов).

 В группе больных с активным РА терапевтический ответ после шестой инфузии ТЦЗ был ассоциирован с полиморфизмом гена TNFAIP3(rs6920220), играющего  значительную роль в активации и регуляции NF-κB-сигнального пути, ответственного за синтез провоспалительных цитокинов и хемокинов (OШ =5,5 [95% ДИ 0,9-32,6], p=0,06). Этот же полиморфизм выявлен в качестве прогностического маркера клинической ремиссии [ОR=4,2, 95% ДИ 1,1-16,7, p=0,04]. В проспективном 4-летнем исследовании на материале больных с РРА выявлена ассоциация полиморфизмов  генов CTLA-4 +49A/G и PTPN22+1858C/ T с резистентностью к терапии БПВП и возникновением показаний для назначения ГИБП [ОR=6,1, 95% ДИ 1,4-26,2, р=0,01 и ОR=4,2, 95% ДИ 1,8-18,3, р=0,03, соответственно]. В группе больных с активным РА из исследования РЕМАРКА неэффективность монотерапии метотрексатом и назначение дополнительно адалимумаба (ГИБП) в соответствии с концепцией "Treat to target" были ассоциированы с полиморфизмами генов CTLA-4 (+49A/G) и PTPN22+1858C/ T.  

 

 

 

 

 

Выводы
В результате проведенного исследования выявлен ряд полиморфизмов изученных генов, ассоциированных с предрасположенностью к развитию РА, клинико-лабораторными параметрами и эффективностью терапии БПВП и ГИБП, которые могут быть использованы в практической медицине. Противоречивые данные о генах, ассоциированных с РА, полученные в различных зарубежных и отечественных исследованиях, могут быть связаны не только с этнической принадлежностью больных , но также и с выборками пациентов, которые могут отличаться по демографическим, клинико-лабораторным, инструментальным и т.д. параметрам при включении в исследование.