Специфичное ингибирование антителами к внеклеточным участкам МК4- и МК3-меланокортиновых рецепторов активности гипоталамической аденилатциклазной системы

Длительная иммунизация крыс пептидами, соответствующими внеклеточным участкам меланокортиновых рецепторов, вызывает метаболические и функциональные нарушения и меняет активность гормональных систем в ЦНС и на периферии. Эти изменения сходны с теми, которые возникают при фармакологическом ингибировании меланокортиновых рецепторов 3-го и 4-го типов (МК3Р и МК4Р). Мы предположили, что выработанные в ходе иммунизации антитела к МК3Р и МК4Р специфично блокируют их активность.

Цель работы состояла в проверке этого предположения, для чего из крови иммунизированных крыс выделяли антитела и исследовали их влияние на чувствительную к МКР-агонистам аденилатциклазную систему в плазматических мембранах гипоталамуса.

Для иммунизации использовали БСА-конъюгированные пептиды 269-280 третьей внеклеточной петли МК3Р и 11-25 N-концевого домена МК4Р. Иммунизацию проводили восьмикратно в течение года. Выделение антител проводили обработкой сывороток крови каприловой кислотой и сульфатом аммония. Очищенную фракцию антител диализовали против ФБС. Восстановление активности антител после диализа контролировали с помощью ИФА. В качестве контроля использовали сыворотку здоровых животных. Активность аденилатциклазы (АЦ) определяли радиоизотопным методом, используя [α-32P]-АТФ. 

В мембранах, преинкубированных с анти-МК4Р-антителами, снижались максимальные АЦ-стимулирующие эффекты МКР-агониста α-меланоцитстимулирующего гормона (α-МСГ) и МК4Р-агониста THIQ и повышались значения EC50 для АЦ-эффекта THIQ. В присутствии анти-МК3Р-антител подавлялся АЦ-стимулирующий эффект МК3Р-агониста γ-МСГ и немного снижался эффект α-МСГ. При этом EC50 для АЦ-эффекта γ-МСГ не менялось. АЦ-эффекты гормонов, действующих через другие типы рецепторов, в присутствии анти-МК4Р- и анти-МК3Р-антител не менялись. 

Таким образом, антитела к внеклеточным участкам МК3Р и МК4Р специфично блокируют передачу через них гормонального сигнала и могут быть отнесены к ингибирующим антителам, что хорошо согласуется с вызываемыми ими функциональными нарушениями у иммунизированных животных.
Работа поддержана Российским Научным Фондом (проект 14-15-00413).