Регистрация / Вход
Прислать материал

Роль Т и В лимфоцитов в реализации вирусиндуцированной бронхиальной астмы у детей

Тема
Роль Т и В лимфоцитов в реализации вирусиндуцированной бронхиальной астмы у детей
Авторы
Просекова Е.В., Ситдикова Т.С., Турянская А.И.
Ключевые слова
иммунопатогенез, бронхиальная астма, дети
Введение
В реализации вирусиндуцированной бронхиальной астмы у детей значимыми факторами являются дисбаланс иммунного ответа и нарушения цитокиновой регуляции.Иммунологические показатели отражают реакции организма на воздействие патологических факторов, активацию или истощение иммунной системы. Основные клеточные популяции иммунной системы человека высоко чувствительны к негативному воздействию различных средовых факторов и являютя индикаторами действия антропогенных факторов.Вовлечение в процесс аллергического воспаления клеток предопределяется сложными механизмами иммунной реактивности и дисбалансом цитокиновой регуляции.
Цель
выявление особенностей функционирования иммунокомпетентных клеток детей с вирусиндуцированной бронхиальной астмой в индустриальном городе, на основе клинико лабораторного мониторинга процессов активации, пролиферации и апоптоза
Материалы и методы

     Исследование проводилось среди детей 3-11 лет (n=25) с верифицированным диагнозом вирусиндуцированной бронхиальной астмы в  г. Владивостоке  на кафедре клинической лабораторной диагностики, общей и клинической иммунологии ГБОУ ВПО ТГМУ Минздрава России (ректор В.Б. Шуматов)  и в  иммунологической  лаборатории краевого клинического центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями   ГБУЗ «ККБ № 2» (заведующая Кругляк С.П.). Дизайн исследования одобрен Междисциплинарным комитетом по этике ГБОУ ВПО ТГМУ Минздрава России  23.06.2014 года, протокол №7 и 24.04.2015 года, протокол №8.

     Материалом  для исследования иммунологических параметров являлась  венозная кровь.  Анализа лейкоцитов, характеристики субпопуляционного состава лимфоцитов, процессов активации клеток  периферической крови   проводили с помощью многопараметрового проточного цитофлюориметра «COULTER EPICS XL»  фирмы Beckman Coulter Inc, станции для подготовки проб Coulter  Prep Plus и  Coulter TO-prer с подбором панелей моноклональных антител с многоцветной комбинацией флюорохромов. Для иммунофенотипирования использовали флюорисцентные частицы Flow Count. Определяли Т-клетки, Т-хелперы, Т-цитотоксические, регуляторный индекс, В-клетки,  натуральные киллеры (NK-клетки),  цитолитические Т-клетки (NKT-клетки) и активированные Т- и В-клетки (CD3+/CD19-, CD3+/CD4+, CD3+/CD8+, СД4+/СД8+, CD3-/CD19+, CD3-/ CD16+ CD56+, CD3+/ CD16+ CD56+, CD3+/HLA-DR+, CD3-/HLA-DR+)

Уровни цитокинов в сыворотке крови определяли в сендвич-варианте твердофазного иммуноферментного анализа реактивами фирмы «R & D Diagnostics Inc» USA согласно прилагаемой инструкции с учетом результатов на иммуноферментном анализаторе “Multiscan” (Финляндия). Расчеты количества цитокинов производили путем построения калибровочной кривой с помощью компьютерной программы и  выражали в пг/мл.   Спонтанную  и митоген-индуцированную продукцию интерлейкина 4 (ИЛ-4) и интерферона гамма (ИФНү) клетками цельной крови исследовали с применением набора реагентов  «ЦИТОКИН-СТИМУЛ–БЕСТ» ЗАО «Вектор-Бест» г. Новосибирск. 

Для статистической обработки всех цифровых данных использовали методы описательной, параметрической и непараметрической статистики программы «Statistica 10 Объем выполненных исследований позволял оценить результаты с достоверностью 95-99%.

Результаты

Цитолитические NK- клетки CD3-/ CD16+ CD56+ определялись с удельным весом 6,33±0,64%  и 225,30±24,39 кл/мкл у детей 3-6 лет и  значимо больше у детей 7-11 лет (15,42±0,93% и 485,65±40,82 кл/мкл при p<0,001)  У детей с БА 3-6 лет выявлено статистически значимое большее количество лейкоцитов  с сохранением  высокого удельного веса нейтрофилов, преобладанием Т-хелперной субпопуляции,  выраженной активацией В-лимфоцитов. Отмечено преобладание интенсивности продукции ИЛ-13 над ИЛ-4.  У детей с бронхиальной астмой (БА) в возрасте 3-6 лет уровень спонтанной продукции ИФНү значимо не отличался от показателей здоровых детей (11,74±0,41 пг/мл при p>0,05), различия зафиксированы  в резервной способности клеток к секреции. Митоген-индуцированная активация клеток к секреции ИФНү у дошкольников с БА наблюдалась в 21,4% (167,70±24,39 пг/мл), у младших школьников резервная способность клеток к секреции ИФНү практически отсутствовала. Средний уровень спонтанной продукции ИФНү у детей 7-11 лет с БА составил -11,71±0,98 пг/мл с доверительным интервалом (ДИ) от 10,081 до 13,33 пг/мл, после индукции митогеном средний уровень -16,99±1,99 пг/мл с ДИ  от 13,69 до 20,33 пг/мл при высокой спонтанной продукции ИЛ-4. При БА у детей с низкой резервной способностью секреции ИФНү отмечалась высокая  частота и триггерная значимость ОРВИ.

Выводы
Проведенные исследования регуляции иммунного ответа детей с верифицированным диагнозом вирусиндуцированной бронхиальной астмы, проживающих в напряженной иммунотропной зоне индустриального города, определили особенности функциональной активности и цитокиновой регуляции иммунокомпетентных клеток, процессов пролиферации и дифференцировки лимфоцитов