Регистрация / Вход
Прислать материал

Эмбриогенез конечностей личинок лягушки травяной в норме и эксперименте с тиреоидным гормоном

Сведения об участнике
ФИО
Едемская Вероника Андреевна
ФИО (на английском языке)
Edemskaya Veronika Andreevna
Название организации
РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева
Информация о докладе
Вид доклада
Постерный доклад
Секция
Биотестирование в нормировании и токсикологическом контроле
Название доклада
Эмбриогенез конечностей личинок лягушки травяной в норме и эксперименте с тиреоидным гормоном
Соавторы доклада (ФИО, организация, город, страна)
Аннотация
Доклад посвящен изучению эмбриогенеза личинок амфибий в природных (нормальных условиях) и особенностям этого процесса в экспериментальных водоемах (с добавлением в водную среду тиреоидного гормона в дозе 6мг/л), что и стало целью исследования.
Результаты исследования имеют высокую актуальность в связи с возможностью использовать ранний эмбриогенез амфибий как экспресс-тест состояния и качества воды во временных природных водоемах весной, в виде микрокосма в лабораторных условиях с оценкой состояния популяции изучаемых амфибий (плотность, особенности питания и внутрипопуляционный прессинг) и как модель фундаментальных исследований эмбриогенеза опорно-двигательного аппарата в норме и при воздействии высоких доз гормона.
Эмбрионы раскладывались на серии сагиттальных срезов, окрашивались гематоксилин-эозином, анализировались и фотографировались. Далее проводилась окраска альциановым синим и ализариновым красным. Были сделаны три вида замеров головастиков: длина тела (от начала головы до хвоста), длина хвоста, длина задней конечности.
На основе полученных замеров вычислялась средняя арифметическая для каждой стадии, ошибка среднего, строились графики.
Элементы скелета конечности последовательно проходят стадии развития от мезенхимной (39 стадия) до хрящевой(45 стадия) и начала оссификации (46 стадии).
Рост конечностей неравномерный, отмечены периоды стабильного роста- от 43 до 47 стадий . С 48 стадии происходит резкий скачок в размерах (почти в 2 раза).
Это может быть объяснено тем, что к 47 стадии основные хрящевые элементы скелета уже сформированы и идет усиленное вытяжение конечностей, прежде чем начнет формироваться молодая костная ткань.
Выявлены периоды неравномерного роста личинок, особенности роста и развития при плотном выращивании личинок (замедление роста, отставание гистогенеза), были обнаружены отклонения от нормы в развитии личинок Rana temporaria под воздействием тиреоидного гормона: неразделение фаланг пальцев задней конечности, появление слабо развитых закладок дополнительной конечности, что может быть элементом внутрипопуляционного давления и конкуренции за территорию и пищевые резервы.
Полученные результаты указывают на важность и актуальность развития изучения эмбриогенеза животных под влиянием гормональных препаратов.
Ключевые слова
эмбриогенез, гормональный препарат, эутирокс, амфибии
Введение

Проблема загрязнения окружающей среды с каждым годом обостряется. Это сказывается на состоянии экосистем и, непосредственно, на водных природных объектах. Следы химических соединений, входящих в состав антидепрессантов, антибиотиков и прочих лекарств находятся повсеместно. Серьезный урон наносят фармацевтические препараты, особенно гормональные, которые попадают в воду через канализацию, или же после отправки их на мусорную свалку смываются дождем в грунт. Хотя медикаменты и используются в малых дозах, но человеческий организм большую их часть не усваивает или разлагает, а выводит наружу. Таким образом, сильнодействующие и химически активные вещества, нехарактерные для "дикой" природы, хоть и в мизерных концентрациях, но попадают на поверхностные воды. Дальнейшее накопление или распад лекарственных препаратов и гормональных веществ в окружающей среде - процесс не изученный до конца, но главное - современные технологии не способны очистить воду от гормонов.

Результаты исследования имеют высокую актуальность  в связи с возможностью использовать ранний эмбриогенез амфибий как экспресс-тест состояния и качества воды во временных природных водоемах весной, в виде микрокосма в лабораторных условиях  с оценкой состояния популяции изучаемых амфибий (плотность,  особенности питания и внутрипопуляционный прессинг) и как модель фундаментальных исследований эмбриогенеза опорно-двигательного аппарата в норме и при воздействии высоких доз гормона.

Лягушка травяная (Rana Temporaria) является самым распространенным и удобным лабораторным животным, с которым имеют дело работники различных специальностей. Легкость добывания, живучесть, подходящие размеры – вот главные свойства, сделавшие ее издавна излюбленным животным для изучения. Помимо этого, лягушка является прекрасным объектом для исследования эмбрионального развития: формирования, развития и закладки различных систем. Преимуществом этого является возможность исследовать развитие не только путем изучения постоянных эмбриологических препаратов, но и непосредственно визуально оценивать особенности развития.
Эутирокс – препарат гормонов щитовидной железы, синтетический левовращающийся изомер тироксина. В организме человека Эутирокс влияет на обмен веществ, рост и развитие тканей. Применяется с целью восполнения гормонального дефицита щитовидной железы. Малые дозы Эутирокса ускоряют синтез жиров и белков. Средние дозы препарата усиливают развитие и рост тканей и их потребность в кислороде; усиливают обмен веществ (белков, жиров и углеводов); стимулируют работу ЦНС и ЦССС. Большие дозы Эутирокса угнетают работу желёз внутренней секреции.

Гипотеза: тиреоидный гормон вызывает отклонения в эмбриогенезе лягушки травяной.

Цель: изучить эмбриогенез пояса задних конечностей и свободных конечностей лягушки травяной Rana Temporaria в норме и эксперименте.

Задачи:

  1. Определить стадии развития головастиков по строению рта и конечностей; проанализировать развитие задних конечностей и их пояса у головастиков лягушки травяной на разных стадиях развития;
  2. Изучить эмбриогенез пояса задних конечностей и свободных конечностей головастиков в норме;
  3. Выявить возможные  аномалии в развитии головастиков в эксперименте.
Методы и материалы

Исследования проводились методом лабораторной обработки. Объем выборки составил 66 особей для исследования в норме и 30 особей для исследования в эксперименте.

Фиксированный материал находился в растворе 10%-го формалина. Производился осмотр внешнего строения (жаберной крышки, жабр - если они есть, ротового аппарата, конечностей) исследуемого материала, в ходе которого были определены стадии развития головастиков. Для определения стадий использовали таблицу из книги Астаурова, Детлафа «Объекты биологии развития». Для стадий 37-48 диагностическими признаками являются строение рта и конечностей.

Приготовление препаратов производилось стандартным методом. По окончании фиксации необходимо удалить из материала излишнее количество фиксирующей жидкости в проточной воде в течение 24-48 часов. Для обезвоживания и уплотнения исследуемого материала использовали батарею спиртов повышающей концентрации (76%, 80% и 96%). Потом материал выдерживали в двух порциях чистого ксилола по полчаса, а затем в смеси парафина с ксилолом по 45 минут; материал помещали в термостат при температуре 37°С, затем последовательно переносили в 1-ый, 2-ой чистый парафин по полчаса. В формочку наливали немного парафина, горячим пинцетом переносили материал и располагали его на дне, доливая остальную часть парафина так, чтобы полностью закрыть объект. Формочку осторожно переносили в холодную воду для более быстрого охлаждения. Затем материал «приклеивали» на деревянный кубик.  Для изготовления срезов деревянный кубик закрепляли в блокодержатель микротома. Получаемые срезы снимали с микротомной бритвы мягкой кисточкой, слегка смоченной водой. Или изогнутой препаровальной иглой и переносили их на поверхность воды, нагретой до 40°С, срезы сразу же расправлялись. Затем срезы вылавливали на сухое обезжиренное стекло, для этого его опускали одним концом в чашку с водой (где находятся срезы), подводили под срез и подхватывали последний. Предметные стекла с парафиновыми срезами высушивали в течение 24 часов в термостате при 37°С. Затем срезы окрашивались гематоксилин - эозином. Окраска проводилась по следующей методике:

1. Перед окраской гематоксилин-эозином  удаляли парафин, помещая на несколько минут стекло со срезами последовательно в 3 порции ксилола (хлороформа).

2. Стекло перенесли в абсолютный спирт, затем в 2 порции 96 спирта и одну порцию 70 спирта по 2-5 мин в каждом.

3.Срезы провели через 2-3 порции дистиллированной воды.

4.Окрашивали гаматоксилином (2-3 мин).

5. Промывали в дистиллированной воде.

6. Провели через 3-4 порции водопроводной воды и одну порцию дистиллированной.

7.  Окрашивали эозином (0,5-2 мин).

8. Промывали в дистиллированной воде.

9. Провели через батарею спиртов 70%, 96%, 96%, 100%.

10. Просветлили в карбол-ксилоле.

11. Провели через 3 порции ксилола.

12. Залили бальзамом.

После окрашивания срезы рассматривались под микроскопом и фотографировались.

Проводилась окраска альциановым синим и ализариновым красным. Головастики омывались от формалина 2 суток в большом объёме воды, выдерживались в растворе альцианового синего (20мг альцианового синего + 60мл 100% этанола + 40 мл ледяной уксусной кислоты). Одни сутки головастики отмывались в 100% этаноле, после чего окрашивались в растворе 2% КОН и ализаринового красного. Далее материал проводился через батарею смесей 2% КОН: глицерин в соотношениях 1:1 и 1:3, в каждом - 1 сутки. Затем выдерживались в глицерине до удаления лишнего красителя.

Были сделаны три вида замеров головастиков: длина тела (от начала головы до хвоста), длина хвоста, длина задней конечности.

На основе полученных замеров вычислялась средняя арифметическая для каждой стадии, после чего строились графики.

    Методом окраски тотальных препаратов конечностей личинки (46, 47, 48 стадии развития) альциановым синим и ализариновым красным мы наблюдали процесс  оссификации.

   Данный способ окраски позволяет дифференцировать тонкие границы взаимоотношений хряща и кости за счет сочетаемого воздействия поэтапного окрашивания. У личинок  альциановый синий в первую очередь окрашивает молодые хрящевые образования в сине-зеленый цвет, а более зрелые хрящевые структуры приобретают с ним насыщенно синий окрас. У взрослых особей все хрящевые структуры окрашиваются в сине-зеленый цвет. Ализариновый красный задерживается в молодых костных структурах окрашивая их в малиновый.

Полученные результаты

Развитие личинок в норме

Было исследовано 66 головастиков, относящихся к 6 стадиям.

Для всех стадий, рассмотренных в этой работе, диагностическими признаками являются строение ротового аппарата и конечностей.

  37 стадия. Внутренняя щель в присоске исчезла. Начало зарастания оперкулярной складки. Правая жабра в виде небольшого пучка, левая тоже укорачивается.

  38 стадия. Оперкулярная складка справа заросла. Из оперкулярного отверстия слева видна левая жабра.

  39 стадия. Ротовой аппарат: на верхней губе один непрерывный ряд зубчиков, на нижней - один прерывистый и два непрерывистых. По наружному краю нижней губы образовались ротовые сосочки. Зачатки задних конечностей в виде небольшого круглого бугорка. Жабры скрыты оперкулярной складкой, иногда в оперкулярном отверстии слева еще виден их меленький фрагмент.

  40 стадия. Ротовой аппарат имею тоже строение. Видны остатки присосок в виде бляшек. Зачатки конечностей в виде удлиненного бугорка.

  41 стадия. Ротовой аппарат: верхняя губа - 1 непрерывный ряд зубчиков и 1 прерывистый; нижняя губа - 1 прерывистый и 2 непрерывных. Остатки присоски в виде скопления меланина в коже. Зачатки конечностей начинают едва заметно изгибаться.

  42 стадия. Ротовой аппарат идентичен предыдущей стадии. Зачаток коленного сустава.

  43 стадия. Ротовой аппарат: верхняя губа - 1 непрерывный и 2 прерывистых ряда зубчиков; нижняя губа - 3 непрерывных ряда. Удлинение и более отчетливое изгибание зачатков конечностей. Дистальный конец их уплощается и принимает форму лопаточки (Приложение 1,2). В выборке было выявлено 7 особей, относящихся к данной стадии.

Приложение 1. 43 стадия. Ротовой аппарат


 

Приложение 2. 43 стадия. Задняя конечность


 

44 стадия. Ротовой аппарат: верхняя губа - 1 непрерывный и 2 прерывистых ряда; нижняя - 4 непрерывных ряда. Зачаток конечности - лопаточка с 3 зубчиками - контуры трех пальцев. Изгиб голеностопного сустава (Приложение 3, 4). Обнаружено 4 особи.     

Приложение 3. 44 стадия. Ротовой аппарат   


             

Приложение 4. 44 стадия. Задняя конечность   


                                                                                   

 45 стадия. Ротовой аппарат тот же. В зачатках конечностей намечаются контуры всех пальцев (Приложение 5). 9 головастиков в выборке относилось к 45 стадии.

Приложение 5. 45 стадия. Задняя конечность


 

46 стадия. Ротовой аппарат тот же. Все пять пальцев задних конечностей обособлены (Приложение 6). В исследуемой совокупности была выявлена 21 особь, относящаяся к данной стадии.

Приложение 6. 46 стадия. Задняя конечность


 

 47 стадия. Ротовой аппарат: верхняя губа - 1 непрерывный и 2 прерывистых ряда; нижняя губа - 3 непрерывных ряда. Задняя конечность четко изогнута на уровне колена, пальцы удлинились, наметились фаланги. Особенно сильно развит 2-й палец. Формирование голеностопного сустава. Между 1 и 2-м и 2 и 3-м пальцами образовался зачаток межпальцевой перегородки (Приложение 7). Обнаружено 15 особей 47 стадии.

Приложение 7. 47 стадия. Задняя конечность


 

   48 стадия. Верхняя губа имеет 1 непрерывный и 2 прерывистых ряда зубчиков. Нижняя губа имеет 3 непрерывных ряда. Полностью сформирована межпальцевая плавательная перепонка (Приложение 8). Было обнаружено 10 особей данной стадии.

Приложение 8. 48 стадия. Задняя конечность

49 стадия. С брюшной стороны  сквозь тонкую кожу видны очертания передних конечностей. Задние конечности в коленном суставе согнуты под тупым углом. Частичное исчезновение роговых частей ротового аппарата.

  50 стадия. Левая передняя конечность вышла через отверстие в оперкулярной мембране. Ротовое отверстие дугообразно изогнуто; в углах губ видны остатки ротовых сосочков.

  51 стадия. Правая передняя конечность прорвала оперкулярную мембрану. Рот удлиняется в латеральном направлении. Окончательно исчезли роговые зубчики и околоротовые сосочки. Начало редукции хвоста.

  52 стадия. Редукция хвоста. Длина его равна половине первоначальной (7 мм). Тазобедренный и коленный суставы конечностей согнуты под прямым углом.

  53 стадия. Хвост равен 1/5 первоначальной длинны (2,8 – 3 мм). Все суставы задних конечностей сгибаются под острым углом.

  54 стадия. Конец метаморфоза. Полная редукция хвоста.

Приложение 9. Длина тела головастиков разных стадий

Приложение 10. Длина хвоста у головастиков разных стадий

Приложение 11. Длина задних конечностей головастиков разных стадий

На первой и второй гистограммах представлена зависимость длины тела и длины хвоста головастика от стадии их развития. Здесь можно выявить три  количественных скачка увеличения длины тела и хвоста головастика (44, 46, 48 стадия развития), и три качественных (43, 45, 47 стадии), в ходе которых идут метаморфические изменения не только данных частей тела, но и других, например,  задних конечностей.

 

Приложение 11 показывает зависимость длины задней конечности от стадии. На ней можно выделить два больших количественных скачка (46, 48 стадии), которые так же сопровождаются активным метаморфозом, а именно, на 46 стадии мы наблюдаем, что все пять пальцев задних конечностей уже обособлены, хотя на 45 стадии они намечались лишь в виде контуров, а на 48 стадии задняя конечность уже  четко изогнута на уровне колена, пальцы длинные и между ними хорошо заметны перепонки, что так же имеет более высокий уровень развития, чем предыдущая стадия.

Приложение 12. длина хвоста, тела и задних конечностей головастиков разных стадий

По данным приложения 12  можно сказать, что увеличение длинны тела, хвоста и задней конечности, при переходе от стадии к стадии, имеет прямую зависимость, без резких скачков и отставаний, что свидетельствует о нормальном развитии.

   В среднем за стадию головастик увеличивает длину тела на 12%, длину хвоста на 15%, длину задней конечности на 25% по сравнению с предыдущей стадией.

  На иллюстрации  9 мы видим, что длина тела головастиков на разных стадиях развития отличается недостоверно, поэтому мы не можем судить о том, что произошел прирост тела. Это может быть связано с тем, что на дынных стадиях в основном идет развитие конечностей, на которые в скором времени выпадет основная роль для передвижения  по суше.  Что же касается хвоста (Приложение 10), то тут мы видим достоверное отличие его длины  на следующих стадиях: 43 стадия отличается от 45;  45, 46 стадии отличаются от 48. Такое отличие может говорить о том, что головастики на данных стадиях пока еще не готовы к выходу на сушу, и, находясь в водной среде, для передвижения используют в основном хвост, который не перестает еще расти до 48 стадии включительно, редукция его начинается только с 51 стадии.

 При этом конечность (Приложение 11) растёт от 43 до 47 стадий равномерно, но на 48 стадии происходит резкий скачок в её размерах примерно в 2 раза. Это может быть объяснено тем, что к 47 стадии основные хрящевые элементы скелета уже сформированы и идет усиленное вытяжение конечностей, прежде чем начнет формироваться молодая костная ткань.

 

Гистологическое развитие головастиков

       Для 46 стадии (Приложение 13) характерно начало оссификации подвздошной кости, бедренной и костей голени. Менее выраженная оссификация, начальный ее этап, так же наблюдается у костей предплюсны. Центры формирования  молодой костной ткани занимают срединное положение. Зрелый хрящ располагается непосредственно вблизи центра оссификации, представляет собой плавный переход из уже образовавшейся костной ткани в молодой хрящ, который занимает дистальный и проксимальный конец костей. Оссификации костей плюсны и фалангов пальцев не наблюдается.

 

     47 стадия (Приложение 14) характеризуется наличием оссификации у подвздошной, бедренной,  большой и малой берцовых костей и костей предплюсны. В отличие от предыдущей стадии у данных костей наблюдаются более выраженные участки формирования костной ткани, которые так же занимают среднее положение. Молодой хрящ менее выражен, по сравнения с предыдущей стадией и так же занимает участки кости рядом с суставом.

 

    Для 48 стадии (Приложение 15) характерно наличие образования костной структуры у подвздошной, бедренной,  большой и малой берцовых костей и костей предплюсны. Отличие от предыдущей стадии заключается в том, что тут мы наблюдаем оссификацию практически на всем протяжении кости. Зрелый хрящ так же имеет плавный переход от уже образовавшейся костной ткани в молодой хрящ, который занимает проксимальные и дистальные участки костей.

   В результате исследования окрашенных препаратов 46, 47 и 48 стадий, отклонений от нормального развития не наблюдалось. Образование молодой костной ткани, как правило, идет в центральной части диафизов, зрелый хрящ представляет собой плавный переход от центра оссификации к молодому хрящу, который занимает пространство вблизи суставов.

 

Развитие головастиков в среде с тиреоидным гормоном.

При развитии головастиков в среде с добавлением гормона в дозе 6мг/л
на 6-9 сутки развития происходит замедление процессов роста личинки, затягивается гистогенез, так в норме в конечностях наблюдается стадия хрящевой закладки конечностей уже на 43-45 стадиях, в эксперименте до конца развития (50 стадия) конечность не проходит стадий зрелого хряща и кости.  Особи быстрее проходят весь метаморфоз примерно на 15-20 суток но гистогенез «задерживается», и остается на стадиях близких к личиночному (в закладках не обнаруживается стадий зрелого и гипертрофированного хряща, костных клеток). Обнаруживаются единичные аномалии в развитии - неразделение фаланг пальцев задней конечности, появляются слабо развитые(соединительнотканные) закладки дополнительной конечности.

Заключение
  1. Были определены стадии развития головастиков по строению рта и конечностей, выявлены особенности развития задних конечностей и их пояса у головастиков лягушки травяной на разных стадиях развития, составлены сравнительные гистограммы, сделаны фото;
  2. Был изучен эмбриогенез пояса задних конечностей и свободных конечностей головастиков в норме, показаны стадии развития хряща и костной ткани (40-45 стадия и с 46-оссификация);
  3. Были обнаружены отклонения от нормы в развитии личинок Rana temporaria под воздействием тиреоидного гормона: неразделение фаланг пальцев задней конечности, появление слабо развитых (соединительнотканных) закладок дополнительной конечности.

Полученные результаты указывают на важность и актуальность развития изучения эмбриогенеза животных под влиянием гормональных препаратов.

Цитируемая литература
1. Астауров Б.Л., Детлаф Т.А. Объекты биологии развития. М.: Наука, 1975 г. - 579с.
2. Афанасьев Ю.И., Юрина Н.А., Котовский Е.Ф. Гистология, цитология и эмбриология. М: медицина, 2002г.— 744 с:
3. Банников А.Г. Жизнь животных, том 4: земноводные, пресмыкающиеся. М.: издательство «просвещение» 1969г. – 488с.
4. Банников А.Г., Даревский И.С., Рустамов А.К. земноводные и пресмыкающиеся СССР. Издательство «Мысль», М.: 1971г. – 301с.
5. Горкин А. П. Биология. Современная иллюстрированная энциклопедия. Гл. ред. - М.:Росмэн-Пресс, 2006г. - 560 с.
6. Карташев Н.Н., Соколов В.Е., Шилов И.А. Практикум по зоологии позвоночных. М.: Высшая школа, 1981 г. - 383 с.
7. Комарова И.П., Тятенкова Н.Н. Методические указания для выполнения курсовых и дипломных работ по морфологии.М: ЯрГУ им. П.Г. Демидова, 1996г. - 16с
8. Левушкин С.И., Шилов И.А.Общая зоология: учеб. для студ. биол. спец. вузов. М.: Высшая школа, 1994г. – 432с.
9. Маслова Г.Т., Сидоров А.В. Развитие амфибий. Белорусский государственный университет. 2007г. – 20с.
10. Ноздрачев А.Д., Поляков Е.Л. Лабораторные животные: анатомия лягушки. М.: Высшая школа 1994г. - 320с.
11. Орлова В.Ф., Семенов Д.В. природа России: жизнь животных. Земноводное и пресмыкающиеся. – М.:»ООО Фирма «Издательство АСТ»», 1999г. – 480с.
12. Писанец Е.М. Знакомьтесь: амфибии и рептилии. - Киев: наук. думка., 1990г. – 126с.
Благодарности
Выражается благодарность Комаровой Ирине Павловне - к.б.н., доценту кафедры морфологии Ярославского государственного университета им. П.Г. Демидова за большой вклад, помощь и курирование во время проведения исследований.
Название, авторы, резюме (на английском языке)

Embryogenesis of grass frog limbs in normal conditions and in the experiment with thyroid hormone

Author: Edemskaya Veronika Andreevna

The report is devoted to the study of amphibian's embryogenesis in the natural (normal conditions) and the features of this process in the experimental ponds (with the addition to water of thyroid hormone in a dose 6 mg/l), and that was the purpose of the study. 
 The results of the study are of high relevance in connection with the possibility to use early embryogenesis of amphibians as test condition and water quality in temporary natural pools in the spring, in the form of the microcosm in the laboratory to assess the state of populations of amphibians studied (density, feeding habits and population pressure) and as a model for basic research of embryogenesis musculoskeletal system in norm and under the effect of high doses of hormone.
Embryos were expanded on a series of sagittal sections, stained with hematoxylin-eosin, were examined and photographed. Then they were painted with altianalis blue and alizarin red. I've made three measurements of tadpoles: body length (from head to tail), tail length, length of hind limb. 
On the basis of the obtained measurements the arithmetic mean for each stage, the error average was calculated and was based graphics.
Elements of the skeleton of the limbs consistently pass the stages of development from the mesenchyme (stage 39) to the cartilage(45) stage and the beginning of ossification (stage 46). 
 The growth of the limbs uneven, periods of stable growth were marked: from 43 to 47 stages . From 48 stage there was a dramatic increase in size (almost 2 times). 
This can be explained by the fact that to 47 stage the main stage of the cartilaginous elements of the skeleton has already been formed and is increased stretching of the limbs before you begin to form a young bone tissue.
Periods of uneven growth of the larvae, characteristics of growth and development in dense growing larvae (slowdown, lag histogenesis) also were identified, abnormalities in the development of the larvae of Rana temporaria under the influence of thyroid hormone were revealed: fusion of phalanges hind legs, the appearance of weakly developed bookmarks extra limbs, that may be is an element of intra-population pressure and competition for territory and food reserves. 
The obtained results indicate the importance and relevance of studying the embryogenesis of animals under the influence of hormones.