Регистрация / Вход
Прислать материал

14.607.21.0099

Аннотация скачать
Постер скачать
Общие сведения
Номер
14.607.21.0099
Тематическое направление
Науки о жизни
Исполнитель проекта
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт аридных зон Южного научного центра Российской академии наук
Название доклада
Идентификация и разработка маркеров для прогнозирования клинически агрессивных форм рака предстательной железы
Докладчик
Черногубова Елена Александровна
Тезисы доклада
Цели и задачи исследования
Цель выполнения ПНИЭР:
1. Идентифицировать и разработать маркеры для прогнозирования развития агрессивных форм рака предстательной железы.
2. Провести проспективные сравнительные исследования идентифицированных маркеров и обосновать более высокую эффективность в сравнении с используемыми в настоящее время маркерами (например, с ПСА).
3. Провести оценку эффективности мониторинга рецидива РПЖ и других вариантов прогрессии заболевания при разных вариантах лечения.
4. Создать методические основы для введения в реальную клиническую практику новых маркеров дифференциальной диагностики и мониторинга эффективности лечения рака предстательной железы.
В рамках поставленной цели предполагается решить следующие задачи:
1. Провести проспективные сравнительные исследования ранее идентифицированных нами маркеров РПЖ и обосновать их эффективность в сравнении с используемыми в настоящее время (например, с ПСА).
2. Уточнить показания для биопсии предстательной железы на основе идентифицированных маркеров в секрете простаты при раке предстательной железы.
3. Идентифицировать прогностические маркеры развития рецидива РПЖ после простатэктомии и гормонолучевой терапии на основе определения показателей калликреин-кининовой, ренин-ангиотензиновой и эластолитической систем через 1, 6, 12 и 18 месяцев после лечения.
4. Провести проспективные сравнительные исследования идентифицированных прогностических маркеров для оценки качества мониторинга рецидива РПЖ и других вариантов прогрессии заболевания при разных вариантах лечения с целью повышения его эффективности.
5. Построить прототип тест-системы диагностики и прогноза развития рака предстательной железы.

Актуальность и новизна исследования
Рак предстательной железы занимает ведущее место в структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями в большинстве экономически развитых стран и является не только медицинской, но и социальной проблемой. Ранняя первичная диагностика и точное прогнозирование развития любых типов злокачественных опухолей существенно повышают эффективность лечения онкологических заболеваний. Однако в настоящее время для большинства наиболее распространённых видов опухолей, в том числе для рака предстательной железы, не идентифицированы информативные прогностические маркеры. Разработка новых подходов к мониторингу неопластических процессов в простате на основе выявления информативных предикторов и маркеров рака предстательной железы, особенно его агрессивных форм - ключевая проблема современной онкоурологии.
В настоящее время в клинической практике доступен ограниченный ряд методов, позволяющих осуществлять персонифицированный прогноз для пациентов с РПЖ. Уровень ПСА и динамика его изменений на сегодня остаются основными предикторами прогнозирования благоприятных или неблагоприятных событий после разных стратегий лечения рака предстательной железы
Выявление белков, ассоциированных с агрессивными формами рака предстательной железы, позволит получить новые знания о молекулярных механизмах канцерогенеза на разных этапах злокачественной трансформации и опухолевой прогрессии.Введение в реальную клиническую практику новых критериев мониторинга неопластических процессов в простате на основе выявления информативных предикторов и маркеров рака предстательной железы, особенно его агрессивных форм, является одним из приоритетных направлений научных разработок в области биомедицины.
Описание исследования

В исследование включено 110 пациентов c РПЖ,  59 из них в клинике Ростовского государственного медицинского университета была выполнена радикальная позадилонная простатэктомия (РПЭ),  51 пациент - получал горномолучевую терапию (ГЛТ). 

Клинический диагноз устанавливали на основании комплекса обследований, определенных стандартами диагностики РПЖ, а именно: определение уровня простатспецифического антигена (ПСА) в сыворотке крови, проведение пальцевого ректального исследования, компьютерной томографии малого таза или трансректального ультразвукового исследования предстательной железы, остеосцинтиграфии, рентгенографии органов грудной полости, ультразвукового исследования (УЗИ) печени и почек. У всех больных диагноз был верифицирован после проведения трансректальной мультифокальной биопсии предстательной железы под контролем УЗИ. Работы с биологическими материалами, полученными у пациентов, были проведены  в соответствии с Национальным стандартом РФ «Надлежащая клиническая практика»  (Good Clinical Practice; GCP) (ГОСТР 52379-2005) международным этическим и научным стандартом планирования и проведения исследований с участием человека в качестве субъекта.

Всем пациентам проводился ПСА-мониторинг через 1, 6, 12 и 18 месяцев после лечения.

Предиктором рецидива заболевания после РПЭ считали повышение уровня ПСА > 0,2 нг/мл после РПЭ, подтвержденное двумя последовательными измерениями и медианой времени удвоения уровня ПСА не более четырёх месяцев. Критерием биохимической прогрессии после ГЛТ считали  3 последовательных повышения уровня ПСА (ПСА ≥ 2 нг/мл относительно надир уровня ПСА), независимо от его значения.

На основе 18 месячного ПСА-мониторинга ретроспективно стратифицировали группы пациентов: с развитием биохимического рецидива и клиническими признаками рецидива; с безрецидивным течением.

Для идентификации ассоциированных с прогрессией РПЖ показателей – потенциальных маркеров клинически агрессивных форм рака простаты определяли  ключевые показатели ренин-ангиотензиновой, калликреин-кининовой систем, активность протеаз лейкоцитов: активность  калликреина (КФ 3.4.21.8) и содержание прекалликреина после отделения  от других сериновых протеаз с помощью ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-сефадексе А-50 по скорости гидролиза N-бензоил-1-аргинин этилового  эфира (БАЭЭ); ингибиторную активность α1-протеиназного ингибитора и  α2-макроглобулина энзиматическим методом; активность кининазы II (ангиотензинпревращающего фермента (АПФ), КФ 3.4.15.1) с использованием в качестве субстрата N-[3-(2-фурил)-акрилоил]-L-фенилаланилглицилглицин (FAPGG); общую аргинин-эстеразную активность по отношению к БАЭЭ, активность эластазы и эластазоподобную активность по скорости гидролиза N-третбутокси-карбонил-аланин-р-нитрофенилового эфира (БАНЭ).

Для иммуногистохимического исследования использован материал полифокальных пункционных биопсий и антитела Angiotensin II Type 2 Receptor (AT2), rabbit polyclonal, 1:100 (Abcam). В работе применены системы визуализации, промывочные и демаскировочные растворы производства Dako (Германия). Постановка иммуногистохимических реакций, интерпретация полученных результатов выполнены в соответствии с общепринятыми правилами.  Экспрессию рецепторов АТ2-R оценивали, подсчитывая долю иммунопозитивных клеток от общего числа опухолевых клеток в поле зрения микроскопа при увеличении в 40 раз.

Для анализа особенностей воспалительно-фибротических изменений в препарате предстательной железы после радикальной простатэктомии, сопутствующие простатической онкопролиферации морфологический материал проводили   морфометрический анализ парапростатических тканей области шейки мочевого пузыря. Для верификации воспалительного процесса использовали следующие морфологические признаки при хроническом простатите: 1) наличие в ткани простаты воспалительных инфильтратов, состоящих преимущественно из лимфоидных элементов с включением макрофагов, гистиоцитов и эозинофилов и расположенных чаще вокруг ацинусов и кровеносных сосудов, реже диффузно; 2) наличие в инфильтратах плазматических клеток; 3) фиброзирование стромы железы; 4) склеротические изменения стенок кровеносных сосудов железы.

Результаты исследования

Идентифицированы  новые прогностические маркеры развития клинически агрессивных форм рака предстательной железы при разных стратегиях лечения. 

Установлено, что прогрессия РПЖ  независимо от  стадии заболевания  и стратегии терапии РПЖ, ассоциирована с увеличением активности АПФ в крови, причем активность АПФ начинает расти раньше, чем отмечается развитие биохимического рецидива.  Совместное определение АПФ и ПСА в крови позволяет выделить группу пациентов с высоким риском развития рецидива после радикальной простатэктомии с чувствительностью и специфичностью 72,7% (р<0,001), 91,2 % (р<0,001); после гормонолучевой терапии - с  чувствительностью и специфичностью 78,6 % (р<0,001),  94,6% (р<0,001). 

 Клиническими признаками локального рецидива РПЖ  после хирургического лечения является наличие патологического образования в зоне везикоуретрального анастомоза в сочетании с повышением уровня ПСА.  Проанализированы особенности воспалительно-фибротических изменений в препарате предстательной железы после радикальной простатэктомии, сопутствующие простатической онкопролиферации.   Впервые в мире нами описан хронический простатит и хронический перипростатит как причина поражения везикоуретрального сегмента после РПЭ. Полученные новые данные о дифференциальной диагностике рака с воспалительными заболеваниями являются приоритетно новыми в рамках исследования проблемы агрессивности рака простаты. Разработан «Способ прогнозирования риска развития стеноза везикоуретрального анастомоза после радикальной простатэктомии» (№ 2016129327, приоритет от 18.07.2016).

Показано, что снижение экспрессии рецепторов антиотензина II второго типа (АТ2-R) в ткани простаты до начала гормонолучевой терапии отмечается у пациентов с последующим развитием биохимического рецидива, следовательно,  дефицит рецепторов к ангиотензину II второго типа ассоциирован с клинически агрессивными формами рака предстательной железы.  При использовании  модели предсказания биохимической прогрессии  после ГЛТ в зависимости от значения АТ2-R в ткани простаты чувствительность теста составляет 87,5% (p<0,01), специфичность – 85,71% (p<0,01). Разработан «Способ прогнозирования риска развития биохимического рецидива у больных раком предстательной железы после гормонолучевой терапии» ( № 2015132526, приоритет от 04.08.2015). Повышение активности АПФ в крови на фоне снижения экспрессии рецепторов к ангиотензину II второго типа в ткани простаты является маркером, прогнозирующим ухудшение клинического исхода заболевания при ГЛТ. 

Завершено формирование коллекции биологических образцов (коллекция включает 537 образцов крови). Сформированы компьютерные регистры пациентов, с постоянным пополнением выборки и данных по мониторингу пациентов с РПЖ после радикальной простатэктомии и гормонолучевой терапии. Создан «Программный комплекс «Регистр пациентов Medical» (№2016619292, приоритет от 01.09.2016). База данных содержит не только клиническую информацию о пациенте, но ее структура пригодна для автоматического анализа данных, что позволяет проводить ретроспективные исследования и выявлять клинически значимые изменения в молекулярном профиле опухоли на основании проведенных ранее исследований, обеспечивает анализ ассоциаций между клиническими параметрами и биомаркерами.

 Идентифицированные маркеры станут основой биомаркерной панели для идентификации клинически агрессивных форм рака предстательной железы.

 

Практическая значимость исследования
В результате выполнения ПНИЭР теоретически разработаны новые подходы к исследованию механизма инициации и прогрессии рака предстательной железы, проанализированы новизна и перспективность развития этих инновационных технологий в диагностики и мониторинге рака предстательной железы; идентифицированы прогностические маркеры эффективности лечения рака предстательной железы, что позволяет на ранних этапах гормонолучевой терапии и после простатэктомии выделить группу пациентов с высоким риском развития рецидива заболевания. На основе анализа молекулярных механизмов участия ренин-ангиотензиновой системы в канцерогенезе и прогрессии рака при РПЖ разработаны научно-методические основы создания тест-системы для диагностики агрессивных форм рака простаты.
Полученные результаты могут быть применены для разработки диагностических тест-систем для решения задач клинической онкологии, что должно способствовать оптимизации способов прогнозирования течения и мониторинга рака предстательной железы, что, в конечном итоге, приведет к снижению уровня смертности при данном заболевании.
Внедрение в реальную клиническую практику новых, эффективных прогностических маркеров развития рецидива рака простаты позволит снизить экономические потери от злокачественных новообразований. Все вышеизложенное, обосновывает высокую научную, экономическую и социальную актуальность решения обозначенных проблем.
Результаты реализации предлагаемого проекта найдут применение в области здравоохранения и медицины, в виде клиническо-лабораторной диагностики, послужат научной основой создания новых технологий диагностики онкологических заболеваний.