Регистрация / Вход
Прислать материал

14.604.21.0145

Аннотация скачать
Постер скачать
Общие сведения
Номер
14.604.21.0145
Тематическое направление
Науки о жизни
Исполнитель проекта
Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук"
Название доклада
Молекулярная диагностика бактериальных и вирусных фитопатогенов винограда, актуальных для сельского хозяйства Крыма.
Докладчик
Виноградова Светлана Владимировна
Тезисы доклада
Цели и задачи исследования
Целью проекта является разработка тест-систем диагностики возбудителей вирусных и бактериальных болезней винограда, распространенных на территории Крыма, для отбора посадочного материала и интегрированной защиты растений. Задачи проекта: 1) анализ разнообразия и распространенности на территории Крымского полуострова вирусных и бактериальных фитопатогенов 2) разработка тест-систем для диагностики вирусных и бактериальных фитопатогенов.
Актуальность и новизна исследования
Вирусные и бактериальные заболевания винограда широко распространены на юге России. Поражение этими заболеваниями приводит к снижению урожайности, содержания сахара, технических качеств винограда и уменьшению срока эксплуатации виноградника.
Симптоматика заболеваний очень вариабельна, что затрудняет их визуальную диагностику. Тест-системы для лабораторной диагностики вирусных и бактериальных заболеваний на российском рынке отсутствуют. В связи с этим создание высокочувствительных и высокоспецифичных наборов является актуальной задачей.
Описание исследования

Диагностику вирусов винограда проводили методом ОТ-ПЦР. Для диагностики фитопатогенных бактерий проводили выделение их в чистую культуру, определение микробиологических и биохимических свойств, секвенирование гена 16S рРНК. Тест-наборы разрабатывались на основе классической ПЦР. 

Результаты исследования

В рамках проекта в пятнадцати  хозяйствах шести основных виноградарских районов проведены весенние и осенние обследования виноградников Крыма на наличие растений с симптомами вирусной и бактериальной инфекции. В результате для проведения лабораторного анализа отобрано 792 образца растительного материала. С помощью метода ОТ-ПЦР обнаружены: Grapevine fleck virus (GFkV) в 161 образце, Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) – в 88, Grapevine fanleaf virus (GFLV) – в 42, Grapevine virus A (GVA) – в 38, Grapevine leafroll-associated viruses-1 – в 37, GLRaV-2 – в 6, GLRaV-3 – в 19 образцах. Наличие выявленных вирусов подтверждено секвенированием ПЦР-продуктов. Наличие вирусов RSPaV, GVA, GLRaV-2 на виноградниках Крыма было показано впервые в России. Впервые с помощью молекулярных методов подтверждено поражение в Крыму винограда бактериями Pseudomonas syringae и Agrobacterium.

Созданы референтная коллекция фитопатогенных бактерий и вирусов винограда, состоящая из 10 штаммов для каждого из 10 наиболее распространенных на территории Крыма видов фитопатогенов; коллекция 100 образцов нуклеиновых кислот нецелевых микроорганизмов, встречающихся на растениях.

Для создания тест-наборов для диагностики обнаруженных патогенов винограда сконструированы специальные реагенты (олигонуклеотидные праймеры), проведены их испытания. На основе отобранных специальных реагентов с чувствительностью и специфичностью не менее 90% по разработанным методикам изготовлены макеты 10 тест-систем для идентификации возбудителей вирусных и бактериальных заболеваний винограда, распространенных на территории Крыма. Составлены проекты инструкций по применению разработанных тест-систем. По разработанной программе и методикам испытаний проведены лабораторные испытания макетов тест-систем. Разработаны лабораторные технологические регламенты изготовления тест-систем.

Практическая значимость исследования
Проект направлен на обеспечение безопасности сельскохозяйственного производства и продовольственной безопасности России, импортозамещение в области производства диагностических наборов. Основные области применения и способы использования результатов проекта следующие: 1) Сельскохозяйственное производство: для выбора здоровых растений для получения черенков, отбора здорового посадочного материала при закладке новых посадок винограда, выбраковки зараженных растений в существующих посадках винограда, определения зараженности растений-резерваторов патогенов и переносчиков вирусных и бактериальных болезней винограда, и интегрированной защиты растений, включающей контроль распространения патогенов, вредителей и сорных и дикорастущих растений- резерваторов для фитопатогенных вирусов и бактерий. 2 ) Развитие инструментальных молекулярно- биологических методов диагностики вирусных и бактериальных фитопатогенов. 3) Изучение динамики развития болезней винограда, изменений генетической структуры популяций фитопатогенных организмов, взаимоотношений фитопатогенов и их переносчиков и резерваторов. 4) Краткосрочный и долговременный прогноз развития вирусных и бактериальных болезней винограда в условиях Крыма и оценка ущерба, наносимого производству винограда болезнями и вредителями.