Регистрация / Вход
Прислать материал

14.575.21.0108

Аннотация скачать
Постер скачать
Общие сведения
Номер
14.575.21.0108
Тематическое направление
Науки о жизни
Исполнитель проекта
федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта"
Название доклада
Разработка метода генной терапии наследственной оптической нейропатии Лебера
Докладчик
Верещагина Наталья Александровна
Тезисы доклада
Цели и задачи исследования
Цель: Разработать метод сдвига уровня гетероплазмии для патогенных мутаций, ассоциированных с наследственной атрофией зрительных нервов Лебера.
Зазачи: (i) модифицировать компоненты системы CRISPR/Cas9 для функционирования внутри митохондрий, (ii) определить эффективность использования модифицированной системы CRISPR/Cas9 для сдвига уровня гетероплазмии патогенной мутации 11778, ассоцированной с наследственной атрофией зрительных нервов Лебера
Актуальность и новизна исследования
Мутации мтДНК приводят к широкому спектру нейромышечных и нейродегенеративных патологий. Одним из методов генной терапии является сдвиг уровня гетероплазмии. Система CRISPR/Cas9 - является РНК-направляемой ДНК нуклеазой и успешно была использована для редактирования мутаций в ядерной ДНК. CRISPR/Cas9 не модифицирована для эффективной работы внутри митохондрий с мтДНК.
Описание исследования

Используя современные методы in silico моделирования и молекулярного клонирования был разработан плазмидных вектор, кодирующий элементы системы CRISPR/Cas9. Методами иммуноцитохимии и конфокальной микроскопии было продемонстрировано, что элементы системы CRISPR/Cas9 эффективно импортируются в митохондрии. Методом капельной цифровой ПЦР было продемонстрировано, что изменяется уровень гетероплазмии мутации 11778 в клетках цитоплазматической гибридной линии по данной мутации. 

Результаты исследования

Был разработан метод оценки эффективности действия молекулярного комплекса на митохондрии, содержащие мутантную мтДНК. Был разработан протокол оценки эффективности действия комплекса на мутантную мтДНК, включающий изменение количества копий ДНК.

Практическая значимость исследования
Повышение качества терапии заболеваний органов зрения, ассоциированных с патогенной мутацией 11778 мтДНК
Постер

Mazunin_0108.ppt