ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРЕПАРАТА ВИРУТЕР ДЛЯ РАЗВИТИЯ ЭМБРИОНОВ И ЛИЧИНОК DANIO RERIO

В настоящее время Danio rerio надежно утвердилась в качестве успешной модели для исследований во многих областях биологии и медицины, прежде всего, для создания новых лекарств и моделировании болезней человека. Модель Danio rerio наиболее эффективна на ранних этапах разработки лекарственных препаратов для обнаружения их эффективности и токсичности до того, как будут использованы более трудоёмкие и дорогие модели млекопитающих. Препарат Вирутер был протестирован в эксперименте. Целью является оценка эффективности препарата, которая определялась выживаемостью эмбрионов и личинок Danio rerio, влиянием препаратов на сроки развития в течение и по окончании эксперимента.

Оценить эффективность препарата Вирутер, которая определялась выживаемостью эмбрионов и личинок Danio rerio в течение и по окончании эксперимента. В спектр задач входит: вывести оптимальную дозу препарата для использования на икринках, сравнить экспериментальных особей с контрольными, пронаблюдать развитие личинок в половозрелых особей.

Препарат вирутер оказывает иммуномодулирующее действие на клеточном и гуморальном уровнях, используется в борьбе с онкологическими заболеваниями, стимулирует лейкопоэз. Подавляет репродукцию ВИЧ, эффективно снижает вирусную нагрузку ВИЧ-инфицированных пациентов. Danio rerio (зебрафиш) является модельным организмом в биологии развития. Большинство генов человека имеют гомологи у зебрафиш (80-90%), а функциональные домены белков, такие, например, как АТР-связывающие домены киназ, имеют 100% идентичность. Целью являлась оценка эффективности препарата Вирутер, которая определялась выживаемостью эмбрионов и личинок Danio rerio в течение и по окончании эксперимента

 Рыбки Danio rerio в количестве 14 штук, икринки в количестве 64 штук(  из них 16 интактны – группа «контроль»), аквариумы (5 штук), лаборатория на кафедре фармакологии СПБГПМУ, препарат вирутер. Препарат использовался в трех дозировках Э1,Э2,Э3 (50 мкг, 1,3 мкг, 0,0325 мкг соответственно). Икринки находились в лунках с содержание воды 200 мкл. Наблюдение длилось 8 суток. В каждой лунке находится по 1 икринке Danio rerio( всего -64).  Первые два ряда икринок- контроль. В последующие два ряда добавлено по 5 микролитров нуклеоспермата натрия ( Вирутер  1 флакон -50 мл). Стрелками указано направление последующего разбавления лекарства. Предварительно каждая икринка находится в 200мл воды. Температура воды 23 градуса.  

                                                                        

                      

Был выбран именно такой метод достижения цели потому,что икринки-достаточно сложный материал для работы. Посредством разбавления препарата в несколько раз в среде обитания икринки можно подобрать дозировку для икринки без летального исхода для последней. Также эмбрион Зебрафиш имеет прозрачное строение, что позволяет наглядно оценить параметры жизнедеятельности. На определенные сутки проявлялись параметры жизнедеятельности, такие как кровообращение, движение, появление на свет из икринки. При использовании каждой дозировки эти параметры отличались. При использовании минимальной, эмбрионы быстрее остальных появились на свет из икринки, однако процент погибших в сравнении со средней дозировкой в дальнейшем личинок выше. При использовании максимальной дозировки, эмбрионы дольше находились в икринке, и процент смертности тоже намного выше.

Статистика в зависимости от дозы приведена в таблице( в процентах показано количество погибших личинок данио рерио).Видно, что оптимальной для выживаемости  является средняя дозировка Е2.

В дальнейших исследованиях так же предполагается наилучшая выживаемость при использовании средней дозировки препаратов.Области использования результатов разнообразны. Эмбриотоксичность покажет возможную угрозу беременным женщинам при применении данных препаратов.  Данный метод можно использовать в тестировании практически любых препаратов, например, таких как пропилтиоупацил, трекрезан, L-тироксин. Области применения препаратов указаны в описании препаратов: трекрезан – иммуномодулирующий препарат с выраженными адаптогенными свойствами. Препарат стимулирует выработку α- и γ-интерферонов, способствует повышению и коррекции иммунного статуса организма за счет активации клеточного и гуморального иммунитета, стимулирует фагоцитарную активность макрофагов. Препарат укрепляет иммунную систему организма, повышает выносливость при физических и умственных нагрузках, уменьшает действие различных токсинов, повышает устойчивость организма к гипоксии, низким и высоким температурам. Пропилтиоурацил обладает выраженным тиреостатическим эффектом (подавляет функциональную активность щитовидной железы).Показания к применению: болезнь Грейвса, болезнь Хашимото и т.д. L-тироксин — это тиреотропное средство, которое применяется при гипофункции щитовидной железы. Стоит упомянуть, что у данио рерио функцию эндокринных органов выполняет кожа. При тестировании гормональных препаратов ожидается наглядное проявление гипо- и гиперпигментации на коже личинок. Доклинические испытания позволят наглядно проследить развитие эмбрионов и личинок под воздействием препаратов. Когда же личинки дорастут до половозрелых особей, можно будет провести ряд тестов на поведение рыбок, оценить склонность к депрессивным состояниям, предпочтения в пище, оценить возможные пороки развития.

ЗЕБРАФИШ КАК МОДЕЛЬ В БИОМЕДИЦИНСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
Н.Ф. Беляева, В.Н. Каширцева1, Н.В. Медведева1, Ю.Ю. Худоклинова2
,О.М. Ипатова, А.И. Арчаков Биомедицинская химия, 2010 том 56, вып. 1, с. 120-131.

Общая гистология и эмбриология рыб М.Л. Калайда, М.В. Нигметзянова, Борисова С.Д.

Enantioselectivity in Zebrafish Embryo Toxicity of the Insecticide Acetofenate
Chao Xu,† Meirong Zhao,† Weiping Liu,†,* Shengwen Chen,‡ and Jiangying Gan§ Research Center of Green Chirality, College of Biological and EnVironmental Engineering, Zhejiang UniVersity of Technology, Hangzhou 310032, People’s Republic of China, Department of Applied Chemistry, Shanghai Second Polytechnic UniVersity, Shanghai 201209, People’s Republic of China,
ReceiVed January 1, 2008

Fishing for Drugs? Zebrafish in Drug Discovery
a report by Michael Schebesta

Danio rerio (zebra-fish in Russian transcription) has firmly established itself as a successful model (the model zebra-fish) for research in many areas of biology and medicine, first of all for developing new medicines. It is also used in modeling human diseases. Human and zebrafish genomes share about 80-90% homology. The drug «Viruter» has immunomodulatory effect, it is used in the fight against cancer, it also stimulates leucopoiesis and suppresses HIV replication. It is effective in reducing the viral load of HIV-infected patients. The main objective was to evaluate the efficiency of the viruter dose which determined survival of embryos and larvae of danio rerio during the experiment and at its end.