Регистрация / Вход
Прислать материал

Получение и характеристика моноклональных антител к CD133 – антигену стволовых клеток опухоли

Сведения об участнике
ФИО
Калениченко Дарья Владимировна
Вуз
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И.Скрябина»
Тезисы (информация о проекте)
Область наук
Науки о жизни и медицина
Раздел области наук
Медицинские биотехнологии
Тема
Получение и характеристика моноклональных антител к CD133 – антигену стволовых клеток опухоли
Резюме
Данная научная работа посвящена получению моноклональных антител к CD133 – антигену стволовых клеток опухоли, определение которых дает новую информацию о возможности прогнозирования течения болезни и эффективности проводимой противоопухолевой терапии. В будущем, полученные МКА могут использоваться в качестве диагностического или терапевтического средства в клинической практике.
Ключевые слова
Моноклональные антитела, стволовые клетки опухоли, CD133
Цели и задачи
Цель:
Получение и характеристика МКА к CD 133 опухолевых стволовых клеток.
Задачи:
1) Осуществить иммунизацию мышей линии BALB/C антигеном CD133;
2) Провести гибридизацию (слияние клеток) для получения клеток-продуцентов МКА к CD133;
3) Получить асцитные жидкости, содержащие МКА к CD133;
4) Провести скрининг полученных асцитных жидкостей, содержащих МКА к CD133;
5) Криоконсервировать клетки-продуценты МКА к CD133.
Введение

Моноклональные антитела (МКА) – это высокоспецифические антитела, продуцируемые одной гибридомной клеткой, полученной путем слияния антителообразующих клеток (спленоцитов) с миеломной линией, к определенному эпитопу антигена.

Т.к. МКА могут распознать любое иммуногенное вещество, области их применения весьма обширны.

В онкологии МКА применяют: в диагностических целях и в терапевтических целях – для таргетной терапии (цитотоксическое действие) или как средство для направленной доставки лекарственных веществ.

Данная научная работа посвящена получению МКА к CD133 стволовых клеток опухоли, определение которых дает новую информацию о возможности прогнозирования течения болезни и эффективности проводимой противоопухолевой терапии. 

Методы и материалы

Материалы:

клеточные линии (меланома кожи человека - mel IbrEE34RMCR (CD133) и мышиная миелома NS-1 (дефектная по гену ГГФРТ),

компоненты для приготовления сред (среда RPMI 1640, ТЭС, L-глутамин, гентамицин, комплекс аминокислот, комплекс витаминов, ДМСО, ГАТ (HAT) лиофилизированый (50х), полиэтиленгликоль),

коммерческие антитела (СD133/2 (293C3)-PE),

лабораторные животные (мыши-самки линии BALB/C).

Методы:

иммунизация животных антигеном;

гибридомная технология (гибридизация клеток, клонирование и скрининг гибридом);

непрямая, прямая и конкурентная реакции иммунофлуоресценции (РИФ).

Описание и обсуждение результатов

Целью проделанной работы явилось получение и характеристика МКА против антигена CD133 стволовых клеток опухоли.

МКА ICO-401 были получены при слиянии клеток миеломы NS-1 с клетками селезенки мыши линии BALB/C 3-кратно иммунизированной клеточной линией меланомы кожи человека mel IbrEE34RMCR. Полученные МКА ICO-401 реагировали в непрямой РИФ с 80% клеток линии mel IbrEE34RMCR (взяты из банка биоматериалов ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России). Метод конкурентного ингибирования показал, что при инкубации клеток mel IbrEE34RMCR с насыщающей концентрацией МКА ICO-401 приводит к почти полной блокаде связывания с этими клетками СD133/2 (293C3)-PE, что доказало - полученные антитела и коммерческие антитела распознают один и тот же антиген. Методом антигенной модуляции было выявлено, что МКА ICO-401 и МКА CD133/2PE реагируют с разными эпитопами молекулы CD133.

Полученные в результате работы  МКА ICO-401 могут в дальнейшем применяться в тест-системах для выявления в общей популяции опухоли стволовых клеток, что позволит более точно подбирать стратегию лечения. Также, не исключено, что МКА к CD133, конъюгированные с лекарственными средствами, токсинами, цитокинами, изотопами или липосомами,  могут быть использованы в качестве терапевтического препарата.

Используемые источники
Yan H.C. et al. The identification of the biological characteristics of human ovarian cancer stem cells, 2014.
Tomao F. et al. Investigating Molecular Profiles of Ovarian Cancer: An Update on Cancer Stem Cells, 2014.
Rutella S. et al. Cells with Characteristics of Cancer Stem/Progenitor Cells Express the CD133 Antigen in Human Endometrial Tumors, 2009.
Curley D. M. et al. CD133 Expression Defines a Tumor Initiating Cell Population in Primary Human Ovarian Cancer, 2009.
Long H. et al. CD133+ ovarian cancer stem-like cells promote non-stem cancer cell metastasis via CCL5 induced epithelial-mesenchymal transition, 2015.
Барышников, А.Ю. Биотерапия опухолей: неудачи и перспективы, 2007.
Оборотова, М.В. Экспрессия маркеров стволовых опухолевых клеток на клеточных линиях меланомы человека, 2015.
Information about the project
Surname Name
Kalenichenko Dariya
Project title
Production and characterization of a monoclonal antibody for СD133 cancer’s stem cells
Summary of the project
This scientific work is dedicated to the production of monoclonal antibody for CD133 cancer's stem cells, the determination of which will provide new information about prognosis of the disease and efficiency of anticancer therapy. In the future, this monoclonal antibody can be used as a diagnostic or therapeutic agent in clinical practice.
Keywords
monoclonal antibody, CD133, cancer stem cells