Прислать материал
Получение и характеристика моноклональных антител к CD133 – антигену стволовых клеток опухоли
Получение и характеристика МКА к CD 133 опухолевых стволовых клеток.
Задачи:
1) Осуществить иммунизацию мышей линии BALB/C антигеном CD133;
2) Провести гибридизацию (слияние клеток) для получения клеток-продуцентов МКА к CD133;
3) Получить асцитные жидкости, содержащие МКА к CD133;
4) Провести скрининг полученных асцитных жидкостей, содержащих МКА к CD133;
5) Криоконсервировать клетки-продуценты МКА к CD133.
Моноклональные антитела (МКА) – это высокоспецифические антитела, продуцируемые одной гибридомной клеткой, полученной путем слияния антителообразующих клеток (спленоцитов) с миеломной линией, к определенному эпитопу антигена.
Т.к. МКА могут распознать любое иммуногенное вещество, области их применения весьма обширны.
В онкологии МКА применяют: в диагностических целях и в терапевтических целях – для таргетной терапии (цитотоксическое действие) или как средство для направленной доставки лекарственных веществ.
Данная научная работа посвящена получению МКА к CD133 стволовых клеток опухоли, определение которых дает новую информацию о возможности прогнозирования течения болезни и эффективности проводимой противоопухолевой терапии.
Материалы:
клеточные линии (меланома кожи человека - mel IbrEE34RMCR (CD133) и мышиная миелома NS-1 (дефектная по гену ГГФРТ),
компоненты для приготовления сред (среда RPMI 1640, ТЭС, L-глутамин, гентамицин, комплекс аминокислот, комплекс витаминов, ДМСО, ГАТ (HAT) лиофилизированый (50х), полиэтиленгликоль),
коммерческие антитела (СD133/2 (293C3)-PE),
лабораторные животные (мыши-самки линии BALB/C).
Методы:
иммунизация животных антигеном;
гибридомная технология (гибридизация клеток, клонирование и скрининг гибридом);
непрямая, прямая и конкурентная реакции иммунофлуоресценции (РИФ).
Целью проделанной работы явилось получение и характеристика МКА против антигена CD133 стволовых клеток опухоли.
МКА ICO-401 были получены при слиянии клеток миеломы NS-1 с клетками селезенки мыши линии BALB/C 3-кратно иммунизированной клеточной линией меланомы кожи человека mel IbrEE34RMCR. Полученные МКА ICO-401 реагировали в непрямой РИФ с 80% клеток линии mel IbrEE34RMCR (взяты из банка биоматериалов ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России). Метод конкурентного ингибирования показал, что при инкубации клеток mel IbrEE34RMCR с насыщающей концентрацией МКА ICO-401 приводит к почти полной блокаде связывания с этими клетками СD133/2 (293C3)-PE, что доказало - полученные антитела и коммерческие антитела распознают один и тот же антиген. Методом антигенной модуляции было выявлено, что МКА ICO-401 и МКА CD133/2PE реагируют с разными эпитопами молекулы CD133.
Полученные в результате работы МКА ICO-401 могут в дальнейшем применяться в тест-системах для выявления в общей популяции опухоли стволовых клеток, что позволит более точно подбирать стратегию лечения. Также, не исключено, что МКА к CD133, конъюгированные с лекарственными средствами, токсинами, цитокинами, изотопами или липосомами, могут быть использованы в качестве терапевтического препарата.
Tomao F. et al. Investigating Molecular Profiles of Ovarian Cancer: An Update on Cancer Stem Cells, 2014.
Rutella S. et al. Cells with Characteristics of Cancer Stem/Progenitor Cells Express the CD133 Antigen in Human Endometrial Tumors, 2009.
Curley D. M. et al. CD133 Expression Defines a Tumor Initiating Cell Population in Primary Human Ovarian Cancer, 2009.
Long H. et al. CD133+ ovarian cancer stem-like cells promote non-stem cancer cell metastasis via CCL5 induced epithelial-mesenchymal transition, 2015.
Барышников, А.Ю. Биотерапия опухолей: неудачи и перспективы, 2007.
Оборотова, М.В. Экспрессия маркеров стволовых опухолевых клеток на клеточных линиях меланомы человека, 2015.