Регистрация / Вход
Прислать материал

ИССЛЕДОВАНИЕ ПЛАЦЕНТАРНОЙ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ В МОЧЕ ПРИ ПРЕЭКЛАМПСИИ.

Сведения об участнике
ФИО
Одениязова Мадина Анварбековна
Вуз
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Астраханский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Тезисы (информация о проекте)
Область наук
Науки о жизни и медицина
Раздел области наук
Медицинские биотехнологии
Тема
ИССЛЕДОВАНИЕ ПЛАЦЕНТАРНОЙ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ В МОЧЕ ПРИ ПРЕЭКЛАМПСИИ.
Резюме
Проведено сравнительное исследование мочи беременных женщин, страдавших гестозом, несколькими методами определения плацентарной щелочной фосфатазы, начиная с рутинных и заканчивая иммуноферментным анализом. Показано, что методом ИФА плацентарная щелочная фосфатаза определяется в 96,6% случаев, больных гестозом со средней концентрацией 75,8±0,8нг/мл. Предлагается способ прогноза развития преэклампсии по анализу мочи на содержание плацентарной щелочной фосфатазы.
Ключевые слова
плацентарная щелочная фосфатаза, преэклампсия, анализ мочи.
Цели и задачи
Цель работы – провести сравнительное исследование мочи беременных женщин, страдавших гестозом несколькими методами определения плацентарной щелочной фосфатазы, начиная с рутинных и заканчивая иммуноферментным анализом.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:
1. Разработать метод выделения плацентарной щелочной фосфатазы, используя новые свойства этого белка и современные методы выделения и очистки белков.
2. Определить количественное содержание плацентарной щелочной фосфатазы (ПЩФ) в моче беременных с гестозами и при неосложненной беременности;
3. Провести сравнительную оценку чувствительности, специфичности и прогностической ценности неинвазивных иммунохимических тестов и стандартных лабораторных анализов в клинико-лабораторной оценке гестозов;
Введение

Преэклампсия (Гестозы) занимает второе место в статистике акушерских осложнений. Их патогенез окончательно не изучен, а диагностика и прогнозирование до настоящего времени представляют собой  трудную задачу[3,4].

 В клинико-лабораторной оценке течения преэклампсии беременности учитываются такие стандартные  лабораторные показатели, как общий анализ крови и мочи, анализы мочи по Нечипоренко, Зимницкому, биохимические показатели крови, показатели системы свёртывания крови и фибринолиза. Однако их чувствительность и специфичность для диагностики преэклампсии незначительны [4].

 

Методы и материалы

Материалы и методы исследования. Предпринятое исследование представляет собой лабораторное изучение ПЩФ у беременных женщин, страдавших гестозом и с нормально протекавшей беременностью. В связи с этим были выбраны, наиболее адекватные, методы их изучения.

     Объектами нашего исследования были моча беременных женщин страдавших гестозами  и с нормально протекавшей беременностью. В работе использовано 30 образцов мочи беременных с неосложнённой беременностью и 65 образцов мочи беременных, страдавших гестозами.

 Использовали следующие методы исследования: иммунодиффузионный анализ в агаре (ИДА), иммуноэлектрофорез (ИЭФ), латекс агглютинация (ЛА), иммуноферментный анализ (ИФА [6]  Все иммунохимические исследования проводились с использованием моноспецифических кроличьих поликлональных антител к  очищенному препарату плацентарной щелочной фосфатазы полученной    по патенту Николаева А.А. и соавторов [3].Определение активности щелочной фосфатазы проводили колориметрически наборами ЗАО "Вектор-Бест", в соответствии с инструкцией производителя. 

Описание и обсуждение результатов

В составе мочи беременных с гестозом щелочная фосфатаза колориметрическим методом выявляется в 80,4% случаев с активностью от 1 до 16 ЕД Боданского (М±m=7,3±1,4) пропорционально степени тяжести протеинурии. В составе мочи здоровых беременных ЩФ колориметрическим методом выявляется в 36,6% случаев с активностью от 1 до 8 ЕД Боданского (М±m=4,8±0,6)  (таб. 1).

Таблица 1.Обнаружение активности  щелочной фосфатазы в моче беременных.

ЩФ в моче

Гестозы Е *(N=56)

Здоровые* беременные (n=30)

Число положительных

активность М±m ЕБ

Число положительных

активность М±m ЕБ

Нафтилфосфат –специфическая

45

7,3±1,4

11

4,8±0,6

*, р˂0,001

Таким образом, калориметрическое исследование мочи на активность щелочной фосфатазы обладает достаточно высокой чувствительностью (80,4%), но обладает низкой специфичностью, которая составляет 30%.

Для количественной идентификации плацентарной щелочной фосфатазы нами был разработан  и применен метод прямого твердофазного иммунофементного анализа.Антитела выделяли на аффинном сорбенте, полученном на основе  цианбромированной сефарозы CL-4B и чистого препарата  плацентарной щелочной фосфатазы.  Элюцию антител проводили 0,01HCL в 0,1М трис-глициновом буфере рН=2,5 с добавлением 0,15 М хлористого натрия.

Фракции антител диализовали против 0,1М аммоний-ацетатного буфера и лиофилизировали. При подборе оптимальной концентрации посадочных антител использовали концентрации 5,0 мкг/мл,  15,0 мкг/мл, 25,0 мкг/мл, 30,0 мкг/мл, 40,0 мкг/мл. Концентрация антител существенно влияла  наклон и  рабочий диапазон калибровочной кривой  при ИФА на плацентарную щелочную фосфатазу (рис1). В наших условиях  концентрация антител 30,0 мкг/мл, позволила получить калибровочную кривую с максимально возможным диапазоном, что повышает точность ИФА.Сравнительное исследование иммунохимических методов исследования показало что все они, начиная с иммунодиффузии и  кончая иммуноферментным анализом обладают высокой специфичностью выявления преэклампсии.При этом методом ИФА определяется ПЩФ в 96,6% случаев, со средней концентрацией 75,8±0,8нг/мл также синхронно с увеличением количества других белков. В контрольной группе у здоровых беременных ПЩФ выявляется в 6,7% случаев со средней концентрацией 5,2±0,5нг/мл. Эти данные получены нами впервые.

 Таким образом, это означает: у 75,0% беременных женщин с суммарным уровнем ПЩФ выше 16,0нг\мл прогноз развития гестоза оказывается верным. Специфичность равна 89,7%. следовательно, у 89,7% пациентов, с заведомо отрицательным прогнозом, результаты теста отрицательны. Отрицательная разница в 14,7% между достоверно положительным прогнозом и достоверно отрицательным прогнозом является фактором неопределенности и в данном случае открывает возможности для введения новых прогностических признаков для повышения чувствительности. 

 

 

Используемые источники
1. ГОСТ Р 53022.3-2008.- Технологии лабораторные клинические. Требования к качеству клинических лабораторных исследований. Часть 3. Правила оценки клинической информативности лабораторных тестов -2008-22с.
2.Николаев А.А., Ахушкова Л.М., Сухарев А.Е. Способ выделения щелочной фосфатазы плацентарного типа. Патент РФ на изобретение №2553624 от 21 мая 2015г.
3.Савельева Г.М., Шалина Р.И., Курцер М.А., Штабницкий А.М., Куртенок Н.В., Коновалова О.В. Эклампсия в современном акушерстве // Акушерство и гинекология. 2010, №6, с. 4-10.
4. Boeldt DS, Hankes AC, Alvarez RE, Khurshid N, Balistreri M, Grummer MA, Yi F, Bird IM Pregnancy programming and preeclampsia: identifying a human endothelial model to study pregnancy-adapted endothelial function and endothelial adaptive failure in preeclamptic subjects.// Adv Exp Med Biol.- 2014-v.814-p.27-47
Information about the project
Surname Name
Odeniyazova Madina Anvarbekovna
Project title
A STUDY OF PLACENTAL ALKALINE PHOSPHATASE IN THE URINE WHEN PREECLAPSIA.
Summary of the project
Comparative study of the urine of pregnant women suffering from, preeclampsia several methods of determining placental alkaline phosphatase, starting and ending with a routine enzyme-linked immunosorbent assay. It is shown that the ELISA placental alkaline phosphatase is determined at 96.6% of cases, patients with preeclampsia with an average concentration of 75,8±0.8 ng/ml. a method of predicting the development of eclampsia by urine analysis on the content of placental alkaline phosphatase.
Keywords
placental alkaline phosphatase, pre-eclampsia, urine analysis.