Алгоритм выбора таргетной антрациклиновой терапии карциномы молочной железы

В проекте представлен алгоритм выбора таргетной антрациклиновой терапии при карциноме молочной железы, основанный на использовании разных методологических подходов к оценке уровней гиперэкспрессии топоизомеразы II α.

Цель исследования - изучить особенности формирования групп пациентов для назначения таргетной антрациклиновой терапии при карциноме молочной железы с использованием разных методологических подходов к оценке уровней гиперэкспрессии топоизомеразы II α.

В последнее время, качестве одного из маркеров, позволяющих оценить ответ на таргетную антрациклиновую терапию и долговременную выживаемость при раке молочной железы (РМЖ), стала рассматриваться топоизомераза II α. Однако до сих пор не существует единого подхода к измерению экспрессии фермента. В то же время, правильное определение гиперэкспрессии фермента является важнейшим обоснованным показанием к назначению при РМЖ таргетной терапии антрациклинами, которая существенно доступнее современных аналогичных схем лечения. В соответствии с вышесказанным, применение различных методик для оценки экспрессии топоизомеразы II α с последующим выбором оптимальной представляет практический интерес.

Биоптаты опухолей от 24 пациентов были исследованы на экспрессию топоизомеразы IIa и Ki-67 иммуногистохимическим (ИГХ) методом. ИГХ исследования были выполнены в лаборатории патоморфологии ГБУЗ СО "Институт медицинских клеточных технологий" (зав. лаб. – д.м.н., проф. С.В. Сазонов) на депарафинизированных срезах с использованием автоматической системы для проведения ИГХ окрашивания Universal Staining System Autosteiner Dako (Дания) и моноклональных мышиных антител Ki - 67 и топоизомераза II a (DakoCytomation). Для ИГХ исследования материал фиксировали в 10% нейтральном формалине не более 24 часов, затем подвергали стандартной гистологической обработке. Демаскировка антигенных детерминант проводилась в миниавтоклаве  Pascal (DakoCytomation), условия: 10 мин. при 15 psi (121°C) в Target Retrival Solution (Dako, S1699). Использовали систему визуализации EnVision+ Dual Link System – HRP (Dako, К4061). Антигенреактивные клетки контрастировали  хромогенным субстратом (3,3-диаминобензидин в буферном растворе - DAB). DAB-позитивные клетки идентифицировали по коричневому окрашиванию ядер клеток. Проводили постановку негативного контроля на тех же срезах исследуемой группы. Оценку ИГХ реакции проводили с путем определения % клеток, ядра которых экспрессируют исследуемые антигены.

Оценка экспрессии топоизомеразы II α в 24 образцах была проведена принципиально с двух разных позиций. Первая основывается на сравнении экспрессируемости TOP2α и Ki-67 как её коамплификанта. В том случае, если экспрессия топоизомеразы II α была равна, либо ниже экспрессии Ki-67, то уровень экспрессии топоизомеразы признавался нормальным. Если экспрессия топоизомеразы превышала экспрессию Кi-67, уровень ее экспрессии признавался повышенным. Вторая позиция основана на применении шкалы экспрессии, впервые предложенной и опубликованной L. Usha с соавт. Если в исследуемом образце опухолевой ткани менее 1 % клеток имеют положительный результат ИГХ реакции, то по шкале экспрессии этот уровень соответствует - 0; если от 1 до 10% - то 1+; если от 11 до 35 % - то 2+; если от 36 до 70 % - то 3+; а если свыше 70 % - то 4+. В соответствии с этими значениями ИГХ экспрессия разделена на 3 категории: гиперэкспрессия (при частоте 3+ и 4+), экспрессия выражена (1+ и 2+) и экспрессия не выражена (0). В нашем исследовании при использовании первого методологического подхода к оценке экспрессии топоизомеразы, её гиперэкспрессия наблюдалась в 2 случаях из 24 (8,3%). Если же для оценки экспрессии использовалась шкала, то гиперэкспрессия топоизомеразы наблюдалась в 6 случаях (25%). С одной стороны, первый метод позволяет установить взаимосвязи между экспрессией топоизомеразы II α и экспрессией её коамплификанта Ki-67, что важно для лучшего понимания биологического поведения опухоли. Но, как можно заметить из полученных результатов, далеко не всегда экспрессия топоизомеразы превышает экспрессию Кi-67 и приходится делать вывод о нормальной экспрессии топоизомеразы, хотя, в ряде случаев, процент клеток, экспрессирующих топоизомеразу, может достигать 80 %. Тогда целесообразно использовать шкалу, предложенную L. Usha с соавт. Она позволяет реально дифференцировать экспрессию топоизомеразы, поскольку фермент сам по себе имеет определенное прогностическое и предиктивное значение. Гиперэкспрессия топоизомеразы IIa связана с лучшим связыванием антрациклиновых антибитиков, обладающих противоопухолевой активностью, с ДНК и, как следствие, - с лучшим ответом на терапию и минимизацией побочных эффектов.

1. Coon J.S., Marcus E., Gupta-Burt S. et al. Amplification and overexpression of topoisomerase II predict response to anthracicline-based therapy in locally advanced breast cancer. Clinical Cancer Res 2002; 8: 1061–7.
2. Jarvinen T., Kononen J., Pelto-Huikko M. et al. Expression of topoisomerase Iialpha is associated with rapid cell proliferation, aneuploidy, and c-erbB2 overexpression in breast cancer. Am J Pathol 1996; 148 (6): 2073–82.
3. MacGrogan G., Rudolph P., Mascarel I. et al. DNA topoisomerase II alpha expression and the response to primary chemotherapy in breast cancer. Br J Cancer 2003; 89 (4): 666–71.
4. Zhu Li, Li Ya-fen, Chen Wei-guo, He Jian-rong, Peng Chen- hong, Zhu Zheng-gang and Li Hong-wei .HER2 and topoisomerase IIа: possible predictors of response to neoadjuvant chemotherapy for breast cancer patients. Chinese Medical Journal 2008; 121(20)

The project demonstrate algorithm of selection of targeted anthracycline therapy for breast carcinoma, based on using of different methodological approaches to the assessment of levels of hyperexpression of topoisomerase II α.