Разработка методологии и создание средств обнаружения для лабораторного in vitro тестирования биологической активности наноматериалов

1. Собрана современная научная и нормативная информация о методах тестирования различных видов биологической активности наночастиц и наноматериалов in vitro.
2. Создана система тестов, позволяющая определять взаимодействие наночастиц с провоспалительными (Толл-подобными рецепторами) рецепторами на поверхности клеток.
3. Разработаны методики обработки клеток наночастицами и выделения РНК. Осуществлено выделение, мечение РНК и оптимизация условий проведения гибридизации с полногеномными (не менее 24 000 транскриптов) микроматрицами ДНК.
4. Разработана методика проведения амплификации и гибридизации кРНК с фокусированными микроматрицами ДНК.

Выбраны оптимальные клеточные тесты для определения цитотоксичности наночастиц на модели эукариотических и прокариотических клеток.
Проведены лабораторные испытания фокусированных микроматриц ДНК на предмет выявления аномалий транскрипции генов при обработке культуры клеток ин витро испытуемыми наночастицами.
  Проведена гибридизация меченой РНК из клеточных культур, обработанных испытуемыми наночастицами, с полногеномными микроматрицами ДНК. Выбраны гены с транскрипционной активностью, наиболее восприимчивой к испытуемым наночастицам.
  Определены взаимодействия наноматериалов с клеточными мембранами и органеллами клетки методами конфокальной и электронной микроскопии; определены действия наноматериалов на ключевые ферментативные реакции клетки.
Разработаны методы тестирования биологических свойств наночастиц на растворах биополимеров, субклеточных фракциях, органеллах с использованием атомно-силовой микроскопии, электрофореза, методов электронного парамагнитного резонанса, ядерного магнитного резонанса и спектроскопии.

1.Разработан алгоритм оценки результатов гибридизации фокусированных микроматриц ДНК на предмет влияния наночастиц на основные клеточные процессы.
2.Составлена РКД на микроматрицы, основанные на использовании фрагментов генов, выбранные в ходе полногеномного анализа.
3.Сформирован унифицированный подход по сравнительной оценке биобезопасности наноматериалов и продукции нанотехнологии в тестах in vitro.
4.Получены лабораторные образцы тест-систем, позволяющих проводить комплексную оценку биологических активностей наноматериалов.