Регистрация / Вход
Прислать материал

Ферментные системы и технологии получения циклодекстринов.

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Выполнение этапа проекта
Проект
02.434.11.3007
Организация
ФГБОУ ВО "МГУПП"
Продолжительность работ
2005 - 2006, 19 мес.
Бюджетные средства
6 млн
Внебюджетные средства
0 млн

Разработка технологии получения циклодекстринов с использованием штаммов гиперпродуцентов циклодекстринтрансфераз.

Соисполнители

Организация
НТЦ "Лекбиотех"
Организация
ОАО "Биохиммаш"
Организация
УИБ РАН

Этапы проекта

1
28.03.2005 - 30.06.2005
2
01.07.2005 - 08.12.2005
Для получения высокоактивного продуцента альфа-ЦГТ-азы из 150 образцов почвы, отобранных из различных мест обитания (Европейская часть России, Крым, Израиль, Турция, Египет и др.) выделены 120 изолятов, осуществляющих деструкцию крахмала.
Методом многокритериального выбора обоснован предпочтительный вариант питательной среды для культивирования в лабораторных условиях штамма Bacillus species 1АМБ, выбранного в результате скрининга для дальнейших исследований.
На основе изучения влияния источников углерода, азота и фосфора на биосинтез альфа-ЦГТ-азы штаммом Bacillus species 1АМБ проведена оптимизация состава питательной среды методом аддитивно-решетчатого математического описания объекта.
Изучено влияние рН исходной ферментационной среды на биосинтез альфа-ЦГТ-азы бактериями Bacillus species 1АМБ.
Разработан способ получения посевного материала Bacillus species 1АМБ.
Разработан усоврешенствованный метод определения бета-ЦГТазной активности, при-годный для создания стандартизованной методики.
Подобраны оптимальные условия разделения продуктов конверсии крахмала в циклодекстрины методом ВЭЖХ.
Методом ПЦР-амплификации выделен фрагмент хромосомной ДНК Bacillus species 10155, несущий полную кодирующую последовательность ЦГТ-азы этого штамма с фланкирующими участками, установлена точная таксономическая принадлежность штамма Bacillus species 10155, опре-делена нуклеотидная последовательность гена ЦГТ-азы, клонирована ко-пия гена, обеспечивающая синтез функционально-активной ЦГТ-азы в клетках E.coli.
Развернуть
3
01.01.2006 - 30.06.2006
Проведена идентификация штамма – продуцента альфа-ЦГТ-азы Bacillus species 1АМБ, выделенного ранее в результате скрининга и селекции, на основании исследования его морфологических, физиологических, биохи-мических и филогенетических признаков.
Проведена оптимизация условий культивирования в лабораторном ферментере продуцента альфа-ЦГТ-азы.
Разработаны лабораторный регламент получения препарата альфа-ЦГТ-азы Г20Х и проект технических условий на этот препарат.
Проведены исследования по выбору типа субстрата (природного крах-мала) для процессов получения альфа- и бета- циклодекстринов методами сольвентно-контролируемой ферментативной конверсии. Показано, что для достижения максимального выхода циклических олигосахаридов в процессе ферментативной конверсии следует использовать картофельный крахмал марки «Экстра», ГОСТ 7699-78.
Изучена реология коллоидных растворов четырех типов крахмала, под-вергнутых термообработке при различных режимах.
Оптимизирован процесс конверсии 25% масс. (по АСВ) крахмала в альфа-циклодекстрин в присутствии 1-метоксидекана при помощи ЦГТазы Paenibacillus macerans. Подобраны факторы, обеспечивающие максимальную селективность процесса в отношении выхода альфа-циклодекстрина. Разра-ботан процесс получения кристаллического альфа-циклодекстрина из кон-версионной смеси, подобран режим сушки кристаллов, разработаны методы анализа качества полученного продукта.
Оптимизирован процесс культивирования продуцента бета-ЦГТазы штамм Paenibacillus sp. Разработан лабораторный регламент получения пре-парата Паенициклин Г20Х.
Подобраны оптимальные условия для сшивки бета-циклодекстрина с поливиниловым спиртом и кремнеземом.
Изучены и подобраны оптимальные условия образования комплекса различных сорбентов с холестерином.
Сконструирован набор векторов для экспрессии гена CGTазы в бацил-лах, определена их структурная и сегрегационная стабильность, параметры синтеза функционально-активной CGTазы.
  Оптимизированы условия культивирования рекомбинантного штам-ма E.coli – продуцента CGTазы, что позволило достичь выхода растворимого и функционально-активного фермента на уровне 1000-2000 Е/мл бактериаль-ной культуры.
Развернуть
4
01.07.2006 - 31.10.2006
Наработана опытная партия ферментного препарата бета-ЦГТ-азы на основе гиперпродуцента, полученного генноинженерным методом.
Получены полимерные производные различных циклодекстринов - коньюгатов циклодекстринов с низкомолекулярным хитозаном и другими носителями для создания комплексов включения с лекарственными препаратами стероидной природы, витаминами и экстрактами ароматических веществ растений.
Разработаны проекты технических условий (ТУ) на препараты бета-циклоклодекстринов и комплекса включения с циклодекстринами.
Проведены технико-экономические расчеты эффективности внедрения разработанных технологий ЦГТ-аз.
Обобщены результаты предыдущих этапов работ. Проведена оценка полноты решения задач и эффективности полученных результатов в сравнении с современным научно-техническим уровнем.
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники" на 2002-2006 годы

Программное мероприятие

1.2 Проблемно-ориентированные поисковые исследования фундаментального характера
Исследование и разработка технологии термостабильных ферментных препаратов для решения задач пищевой, биотехнологической и фармацевтической промышленности. 1. Клонирование и экспрессия гена кератиназы (КФ 3.4.99.12), секретируемого рекомбинант-ным штаммом Bacillus subtillis, а также изучение возможных областей ее практического приме-нения 2. Разработка технологии получения термостабильного молокосвертывающего ферментного препарата пепсина (КФ 3.4.23.12) для молочной промышленности 3. Разработка технологии получения фитаз (КФ 3.1.1.8) с улучшенными промышленно-ценными свойствами 4. Исследование структурно-функциональных свойств белков – оксидоредуктаз (лактатдегид-рогеназа, КФ 1.1.1.27) и гидролаз (β-фруктофуранозидаза, КФ 3.2.1.26), перспективных для ис-пользования в фармацевтической и биотехнологической промышленности 5. Исследование экзо- (карбоксипептидаза А, КФ 3.4.17.1) и эндопептидаз (химотрипсин, КФ 3.4.21.1 2) молочнокислых микроорганизмов 6. Изучение свойств протеаз (КФ 3.4.21) плесневого гриба Peni
Продолжительность работ
2011, 5 мес.
Бюджетные средства
2 млн
профинансировано
Продолжительность работ
2014, 6 мес.
Бюджетные средства
4 млн
Организация
ФГБОУ ВО "ВГУИТ"
профинансировано
Продолжительность работ
2016 - 2018, 26 мес.
Бюджетные средства
33 млн
профинансировано
Тема
Ферментные системы и технологии получения циклодекстринов
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
6 млн
Количество заявок
4
Тема
Получение кормовых ферментных препаратов с использованием рекомбинантных продуцентов
Продолжительность работ
2017 - 2019, 26 мес.
Бюджетные средства
180 млн
Количество заявок
5
Тема
Доклинические испытания противоопухолевого ферментного препарата - метионин–гамма-лиазы
Продолжительность работ
2016 - 2018, 26 мес.
Бюджетные средства
33 млн
Количество заявок
1
Тема
Доклинические исследования инактивированной вакцины против полиомиелита, полученной на основе аттенуированных штаммов полиовируса (штаммов Сэбина).
Продолжительность работ
2015 - 2017, 24 мес.
Бюджетные средства
33 млн
Количество заявок
2
Тема
Разработка штамма-продуцента и методики очистки рекомбинантного плазминогена человека для тромболитической терапии.
Продолжительность работ
2008 - 2009, 17 мес.
Бюджетные средства
7,8 млн
Количество заявок
2