Регистрация / Вход
Прислать материал

Молекулярная диагностика детских инфекций методом атомно-силовой микроскопии.

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Выполнение этапа проекта
Продолжительность работ
2005 - 2006, 18 мес.
Бюджетные средства
6 млн
Внебюджетные средства
0 млн

Создание технологии высокоэффективной диагностики детских инфекций, включая детекцию вирусов – возбудителей детских инфекций, оценки эффективности и качества вакцин против детских инфекций, основанных на использовании метода атомно-силовой микроскопии.

Этапы проекта

1
29.04.2005 - 30.06.2005
2
01.07.2005 - 09.12.2005
В ходе работы была разработана модельная система на основе атомно-силовой микроскопии (АСМ). Использование модельной системы позволило создать протокол модификации подложки, определить оптимальные условия необходимые для образования комплексов антиген-антитело на подложках, разработать способы определения фоновых значений, провести оценку специфичности системы детекции иммунных комплексов. Подходы, проверенные в модельной системе, применяли в дальнейшем в исследованиях иммунных комплексов в экспериментальных системах, в которых использовались человеческие иммуноглобулины, имеющие клиническое значение. С помощью АСМ анализировали комплексы антиген-антитело с иммуноглобулинами разных изотипов –IgG и IgM. Содержание данных иммуноглобулинов отражает различное состояние иммунной системы при заболевании. Было показано, что с помощью АСМ можно отличать IgG и IgM комплексы с антигеном без проведения дополнительных стадий обработки, основываясь на разнице в форме и размерах данных комплексов. Использование количественного подхода показало, что число формирующихся комплексов поли-АЧ с IgM напрямую зависит от концентрации вносимых IgM. Достоверность полученных данных подтверждена с помощью иммуноферментного анализа. В ходе работы была продемонстрирована принципиальная возможность детектировать специфические антитела в сыворотке в низких концентрациях. На основе АСМ был разработан непрямой метод детекции комплексов антиген- антитело. Разработанный в данной работе подход АСМ сканирования и визуализации комплексов планируется применить при дальнейшем анализе специфичных при развитии инфекционных заболеваний компонентов в сыворотках пациентов.
Развернуть
3
01.01.2006 - 30.06.2006
В ходе выполнения данного этапа были разработаны чувствительные ПЦР тест системы, позволяющие оценивать вирусную нагрузку кори и краснухи в различных биологических материалах (разделы 1.1.2-1.1.4. -1.2.2.-1.2.3 промежуточного отчета НИР за 3 этап). Проведена оценка 42 серий коревой вакцины, в которых был уточнен титр вируса. Предложен неконкурентный внутренний контроль – коревая вакцина - для проведения RТ-PCR других инфекций – краснухи, паротита и др. Предложено использовать атомно-силовую микроскопию (АСМ) в качестве дополнительной процедуры при оценке качества вакцин, широко применяемых для иммунизации населения в России. Преимущество метода АСМ состоит в том, что он позволяет визуально оценивать состояние целостности вирусных частиц и деградацию вирусного материала в вакцине и кроме того, является быстрым и экономически выгодным метод анализа. Проведено исследование коревой вакцины с помощью АСМ (разделы 3.1.-3.3 отчета). Для применения к вирусо-содержащим материалам была разработана модельная система для оценки сорбции крупных надмолекулярных комплексов и проанализированы новые полимерные материалы с помощью АСМ (разделы 2.1 и 2.2.)
Развернуть
4
01.07.2006 - 31.10.2006
Была разработана тест-система, предназначенная для детекции вирусных частиц с помощью АСМ. Проведен анализ специфичности, эффективности, возможности количественного анализа данной системы. В ходе работы были проверены различные схемы проведения анализа и выбран наиболее оптимальный метод модификации подложки специфичными антителами. Разработаны процедуры удаления неспецифически связавшихся белков, выравнивания слоев на подложке, подсчета вирусных частиц. Проведен сравнительный анализ морфологии вирусных частиц, сорбированных на немодифицированные и модифицированные подложки. Был разработан алгоритм подсчета количества вирусных частиц. Количественный анализ вируссодержащих препаратов, проведенный с помощью АСМ, сравнивали другим независимым количественным методом - ПЦР в реальном времени. Было получены сопоставимые данные. С помощью АСМ было показано, что количество вирусных частиц в 1 мл вакцины составляет 2,8*107. Тогда как методом ПЦР в реальном времени было показано, что количество вирусных частиц 2,34*107. Таким образом, данные исследования демонстрируют возможность применения атомно-силовой микроскопии для количественного анализа вирусных частиц. Проведены модельные исследования взаимодействия белков оболочки вируса с рецептором на примере рекомбинантного белка вируса гепатита С – Е2 с рецептором –CD81.
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники" на 2002-2006 годы

Программное мероприятие

1.2 Проблемно-ориентированные поисковые исследования фундаментального характера
Продолжительность работ
2007 - 2008, 14 мес.
Бюджетные средства
1,5 млн
Организация
ИБМХ
профинансировано
Продолжительность работ
2007 - 2008, 14 мес.
Бюджетные средства
7,5 млн
профинансировано
Тема
Молекулярная диагностика детских инфекций методом атомно-силовой микроскопии
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
6 млн
Количество заявок
9
Тема
Молекулярная диагностика фитоплазменной инфекции сельскохозяйственных культур
Продолжительность работ
2017 - 2018, 14 мес.
Бюджетные средства
14 млн
Количество заявок
0
Тема
Разработка метода экспресс-диагностики перинатальных инфекций на основе количественной оценки содержания ДНК цитомегаловируса и бактерий, колонизирующих организм плода и новорожденного.
Продолжительность работ
2009 - 2010, 17 мес.
Бюджетные средства
7 млн
Количество заявок
4
Тема
Проведение проблемно-ориентированных поисковых исследований по разработке методологии и методов применения атомно-силовой микроскопии, синхротронного излучения и других методов для медицинской диагностики.
Продолжительность работ
2011 - 2012, 20 мес.
Бюджетные средства
40 млн
Количество заявок
26
Тема
Системы иммунодетекции особо опасных инфекций, в том числе с использованием технологии фагового дисплея.
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
10 млн
Количество заявок
3