Роль белка Каизо в развитии рака кишечника

Для начала проведения экспериментальных работ требовалось получение популяции АРС1638, МLH и Мuc2 мутантных мышей из американских вивариев. Для этого в течение первого этапа работы по НИР проводилась подготовка документации, ветеринарных сертификатов, разрешений Минздрава на импорт. Одновременно проведен всесторонний анализ мышей, несущих ген Каизо. Генетическим тестированием подтвержден перевод мышей на тот же генетический фон С57ВL/6, что и АРС1638, МLH и Мuc2 мутантные мыши. В связи с задержкой американской стороной перевода мышей этих линий в SPF статус, необходимый для транспортировки животных в Россию, для ускорения процесса перевода Каизо мутантных мышей на генетический фон раковых мышей были произведены получение разрешение на вывоз и отправка Каизо КО мышей в Американскую лабораторию Медицинского центра города Нешвиль. По прошествии карантина подтвержден их SPF статус. Животные подготовлены для скрещивания АРС1638, МLH и Мuc2 мышами

Прохождение животными карантина. Разведение стада APC1638, MLH и Muc2 мышей в российском виварии. Криоконсервирование эмбрионов мышей для возможного использования и распространения на территории РФ в научно-исследовательских целях. Переведение каизо мутантных мышей на генетический фон раковых мышей. Анализ частоты метастазирования, частоты возникновения опухолей кишечника у каизо дефектных мышей на раковом генетическом фоне.

В результате выполнения работы на третьем этапе проведено транскрипционное профилирование опухолей кишечника мыши линии APC1638 и APC1638 с генетическим удаленным локусом Каизо. Определены гены, чья транскрипционная активность увеличивается при отстутствии гена Каизо. В составе этих генов есть как гены раковые супрессоры (p16, HIC1, MLH), так и гены, кодирующие эффекторные ферменты, чья функция в раковой клетке до конца непонятна. Проведено независимое подтверждение результатов транскрипционного профилирования с помощью метода Нозерн блот гибридизации. Проведено исследование последствий выключения гена Каизо методом котортких интереферирующих РНК. Удалось достичь 5-7 кратного уменьшения уровня экспрессии белка Каизо в клетках рака кишечника лини colo320. Полученные результаты легли в основу одной поданой публикации совместно с американской группой.
По результатам работы на третьем этапе и на протяжении всего проекта мы сформулировали и подтвердили гипотезу, согласно которой, уменьшение злокачественного потенциала опухолей кишечника в отсутствии гена Каизо происходит за счет увеличения экспрессии метилированных генов раковых супрессоров. При этом фактическое метилирование ДНК не изменяется в области ЦфГ островков и промоторов. Это подтверждает, что in vivo Каизо связан с метилированными участками генов раковых супрессоров и подавляет их транскрипцию. Эти результаты открывают возможность для использования химерной молекулы Каизо для реактивации генов раковых супрессоров в процессе генотерапии опухолей кишечника человека.