Регистрация / Вход
Прислать материал

Системы иммунодетекции особо опасных инфекций, в том числе с использованием технологии фагового дисплея.

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Выполнение этапа проекта
Продолжительность работ
2005 - 2006, 15 мес.
Бюджетные средства
10 млн
Внебюджетные средства
0 млн

разработка, апробация и технологическая реализация иммуноаналитических тест-систем для специфического определения возбудителей особо опасных инфекций, в том числе основанных на технологии фагового дисплея

Этапы проекта

1
01.07.2005 - 30.09.2005
2
01.10.2005 - 09.12.2005
Проведена иммунизация мышей ЛПС F. tularensis с последующим анализом иммунного ответа. получена к ДНК из иммунных спленоцитов, проведена амплификация и клонирование Н и I.- цепей антил, а также скрининг библиотеки.
Развернуть
3
01.01.2006 - 30.06.2006
Приготовлены S-корпускулярные и растворимые антигены ЛПС бруцелл видов В.abortus, B.melitensis и B.suis.
Проведена иммунизация мышей дезинтегратом и растворимым ЛПС В.abortus, проанализирован иммунный ответ, получены и охарактеризованы гибридомы, специфичные к ЛПС Brucella, отработана методика получения высокоочищенных моноклональных антител (мАТ) в препаративных количествах.
Получена кДНК из иммунных спленоцитов, проведена амплификация и клонирование VH-цепи моноклонального антитела к ЛПС Brucella в различные экспрессирующие вектора. Определена нуклеотидная последовательность клонированного моноклонального антитела, проведен его анализ в BLAST. Проведен анализ экспрессии и растворимости мАТ, клонированного в различных экспрессионных векторах. Создан вектор, кодирующий антитело ламы в VHH-формате. В ламовый вектор клонированы CDRs мАТ, специфичного к ЛПС Brucella. Получены рекомбинантные антитела в VHH-формате в секретируемом виде.
Из наивной библиотеки антител человека в формате scFv в результате селекции были отобраны фаговые клоны, продуцирующие антитела, специфичные к ЛПС Brucella и F.tularensis. Последовательности, кодирующие рекомбинантные антитела в scFv формате были переклонированы в экспрессирующий вектор. Миниантитела были очищены из растворимой фракции и из телец включения. Нерастворимые антитела были подвергнуты рефолдингу. Проведен анализ аффинности рекомбинантных антител.
Синтезированы конъюгаты мАТ против ЛПС Brucella и F.tularensis с бактериофагом фХ174, проведен анализ их специфической активности и возможности использования в диагностических тест-системах.
Развернуть
4
01.07.2006 - 31.10.2006
АННОТАЦИОННЫЙ ОТЧЕТ

Отчет 74 с, 6 ч, 25 рис, 21 табл, 16 источ.
ЛИПОПОЛИСАХАРИД, ТЕСТ-СИСТЕМА, ИФА, РПГА, ФАГОИММУНОТЕСТ
Объектом исследования являются тест-системы для выявления ЛПС и клеток Brucella и F.tularensis.
Цель работы: разработка, апробация и производство экспериментальных тест-систем для выявления ЛПС и клеток Brucella и F.tularensis.
Разработаны тест-системы для иммунодетекции туляремии и бруцеллеза, обладающие лучшей специфичностью и чувствительностью, в сравнении с более ранними аналогами. Две тест-системы для Brucella (ИФА и РПГА-АКАТ), одна для F.tularensis (РПГА-АКАТ). Разработана ИФА и фагоиммунотест для туляремии.
Основные конструктивные и технико-эксплуатационные характеристики:
1. Тест-системы для иммунодетекции Brucella:
a. ИФА: 100% специфичность. Чувствительность по клеткам 103-104 мк/мл, по ЛПС-0,125 нг/мл.
b. РПГА-АКАТ: 100% специфичность. Чувствительность по клеткам 103-104 мк/мл, по ЛПС 0,1–0,2 нг/мл.
2. Тест-системы для иммунодетекции F.tularensis:
a. ИФА: 100% специфичность. Чувствительность по клеткам поликлонального варианта 2,5–5×105 мк/мл, моноклонального варианта 3×104–2,5×105 мк/мл. Чувствительность по ЛПС для поликлонального и моноклонального варианта 10 и 2,5 нг/мл соответственно.
b. РПГА: 100% специфичность. Чувствительность по клеткам 103-104 мк/мл (по ОСО ГИСК), 104–105 тк/мл (по КОЕ/мл). По ЛПС - 0,25 нг/мл.
c. Фагоиммунотест: Чувствительность по ЛПС не менее 0,078 нг/мл, по клеткам не менее 156 мк/мл.
Степень внедрения: разработано и выпущено по три экспериментальные серии трех тест-систем для иммунодетекции туляремии и бруцеллеза. Создана научно-техническая документация.
Область применения: иммунодетекция туляремии и бруцеллеза.

Рук. темы, д.м.н.
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники" на 2002-2006 годы

Программное мероприятие

1.3 Прикладные разработки в рамках системы приоритетных направлений
Продолжительность работ
2005 - 2006, 18 мес.
Бюджетные средства
6 млн
профинансировано
Тема
Системы иммунодетекции особо опасных инфекций, в том числе с использованием технологии фагового дисплея.
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
10 млн
Количество заявок
3
Тема
Молекулярная диагностика детских инфекций методом атомно-силовой микроскопии
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
6 млн
Количество заявок
9
Тема
Комплексные тест-системы для идентификации и анализа лекарственной устойчивости возбудителей инфекций.
Продолжительность работ
2014 - 2016, 27 мес.
Бюджетные средства
173 млн
Количество заявок
4
Тема
Разработка современных методов вирусологического, экологического, иммунологического и молекулярно-эпидемиологического мониторинга инфекций, вызываемых возбудителями новых и возвращающихся вирусных инфекций, циркулирующих на территории Российской Федерации: арбовирусных инфекций и других вирусных инфекций.
Продолжительность работ
2009 - 2010, 17 мес.
Бюджетные средства
7 млн
Количество заявок
2
Тема
Организационно-техническое обеспечение проведения Всероссийской научной школы для молодежи «Актуальные особо опасные карантинные инфекции животных и птиц»
Продолжительность работ
2010, 8 мес.
Бюджетные средства
1,6 млн
Количество заявок
1