Создание универсальной технологии ранней диагностики злокачественных опухолей вирусного и невирусного происхождения.

Cоздан банк замороженных в жидком азоте опухолевых материалов, где собраны 36 образцов рака шейки матки от больных на разных стадиях заболевания, которые охарактеризованы по клиническим и патоморфологическим критериям, присутствию генома вирусов папиллом человека (по данным цепной полимеразной реакции к отдельным генам этих вирусов), интегрированного или эписомального состояния вирусной ДНК. Кроме того, в банк депонировано 8 образцов от больных с предклиническими поражениями шейки матки и 5 образцов рака простаты. собрано несколько образцов опухолей невирусного происхождения.
Наработано необходимое количество культивируемых клеток для тестирования теломеразной активности – выполнено полностью:
- 5 линий клеток опухолей шейки матки (HeLa, CaSki, SiHa, SW56 и C33);
- 4 линии клеток, полученных в ранее в результате трансфекции генами Е6 и Е7 вируса папиллом человека тип 18;
- 2 лимфоидные суспензионные культуры клеток человека, полученных при кокультивировании лимфатического узла больного лимфомой Ходжкина и мононуклеаров периферической крови больного раком легкого с лимфоидной реакций миелоидного типа.
Отработан метод тестирования теломеразной активности (TRAP-assay). Теломеразная активность выявлена вo всех 14 протестированных образцах рака шейки матки.
Проведен синтез модифицированных биотин-содержащих олигонуклеотидов, аналогов специфического ДНК-праймера, удлиняемого теломеразой.
Клонированы гены фрагментов β-галоктазидазы и β-лактамазы в виде слитых с аффинными доменами белков.
Данные результаты в сочетании с ранее полученными опубликованы в 2 статьях (их них одна в международном журнале, 1 - в руководстве по клинической гинекологии)

- дополнительно создан банк замороженных образцов предраковых
  поражений шейки матки различных стадий;
  - собраны биопсийные материалы от больных раком простаты;
  - во всех собранных образцах проведено тестирование теломеразной активности
  методом TRAP-assay.
  Проведена проверка возможности использования флуоресцентных аналогов
  дезоксинуклеозид-трифосфатов для тестирования теломеразной активности с
  помощью модифицированного TRAP-assay. Показано, что радиоактивный вариант
  даёт более достоверные результаты.
  Отработаны условия экспрессии и получены в чистом виде химерные белки: из ww-
  домена b-галактозидазы и ZZ-а белка А золотистого стафилококка
  -

Оптимизирован метод тестирования теломеразной активности в опухолях вирусного
  (рак шейки матки) и невирусного происхождения (рак яичников и простаты) и в
  предопухолевых поражениях шейки матки.
  Предложен принципиально новый метод тестирования теломеразной активности
  в опухолях.
  В опухолевых клетках обнаружена полноразмерная копия РНК. кодирущей белок
  теломеразы (hTERT) и несколько
  сплайсированных вариантов этой РНК. В большинстве образцов рака шейки матки
  уровня транскрипции гена, кодирующего теломеразу. В опухолях копийность гена
  hTERT оставалась без изменений.