Молекулярно-генетические основы жизнеугрожающих желудочковых тахикардий

Проведен анализ научной и клинической литературы, нормативно-технической документации и других материалов, относящихся к разрабатываемой теме. Сформирована выборка пациентов с первичными желудочковыми нарушениями сердечного ритма, включившая в себя 30 неродственных пациентов, для которых было проведено полное клиническое и кардиологическое обследование. Проведен забор крови от пациентов; выделены образцы ДНК, сформирована библиотека ДНК больных с первичными желудочковыми нарушениями сердечного ритма. Собраны генеалогические данные в семьях пациентов исследуемой группы, от больных родственников пробандов также получен биологический материал. Сформирована контрольная группа здоровых индивидов в количестве 50 человек, для которых не выявлено при клиническом обследовании признаков нарушений сердечного ритма. От них также получен биологический материал, выделена ДНК, сформирована библиотека ДНК здоровых лиц. Разработана общая методика проведения исследований. Проанализированы кодирующие последовательности и прилагающие интронные области гена SCN5A, кодирующего альфа-субъединицу натриевого канала, экспрессирующегося в миокарде. Выбраны и синтезированы праймеры для амплификации 28 различных участков ДНК, соответствующих 2-28 экзонам гена SCN5A. Разработаны условия полимеразной цепной реакции, подобраны необходимые параметры реакции, а также условия денатурации и электрофореза. Выявлены фрагменты с измененной электрофоретической подвижностью, для которых проведено определение первичной последовательности. При сравнении со стандартными последовательностями баз данных NCBI обнаружены нуклеотидные замены в гетерозиготном и гомозиготном состоянии. Проведен поиск и определение частот встречаемости выявленных нуклеотидных замен в исследованных генах в ДНК индивидов контрольной группы и сравнение их с группой больных. Проанализированы особенности течения заболевания у больных с идентифицированными мутациями. Наблюдается вариабельность клинического течения для больных, обнаруживших мутации в одном и том же гене, а также даже в пределах одной семьи между родственниками, имеющими одну и ту же мутацию.