Регистрация / Вход
Прислать материал

Проведение научных исследований молодыми учеными. Определение сайтов фосфорилирования белка Kaiso у человека.

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Выполнение этапа проекта
Проект
02.442.11.7450
Продолжительность работ
2006, 8 мес.
Бюджетные средства
0,4 млн
Внебюджетные средства
0 млн

Информация отсутствует

Этапы проекта

1
28.02.2006 - 31.05.2006
осуществлено клонирование полноразмерного гена каизо и часть гена для экспрессии БТБ домена, получена бакмидная ДНК на их основе, проведена трансфекция клеток насекомых.
Развернуть
2
01.06.2006 - 02.10.2006
В ходе проведения работы была предпринята попытка определения конкретных аминокислотных остатков в составе белка Каизо подвергающихся одной из посттрансляционных модификаций – фосфорелированию. Ранее проведенные исследования в нашей лаборатории позволили установить наличие 2 сайтов фосфорелирования, причем все два сайта были расположены в составе БТБ домена. БТБ домен белка Каизо участвует в белок-белковых взаимодействиях и нужен для привлечения корепрессоров транскрипции. Таким образом, наличие пострансляционных модификаций именно в этом домене может влиять на эту способность белка. Дополнительно проведенные исследования с применение тонкослойного хроматографического разделения продуктов полного гидролиза белка Каизо показало, что оба аминокислотных остатка являются аминокислотными остатками серина. Для определения положения этих серинов в составе белка было предложена создать систему для экспрессии белка Каизо и его БТБ домена в клетках насекомых с использованием бакуловируса, т.к. при экспрессии в такой системе происходят все посттрансляционные модификации которые мы и собираемся изучать и с другой стороны обеспечивается наработка большого количества белка.
Для решения данной задачи так же подразумевает наличие способа качественной очистки белка для последующей масс-спектрометрии. В качестве такой системы было решено использовать метал-хелатную хромотографию. Данный способ позволяет производить очистку белков в денатурирующих условиях, что является его несомненным преимуществом перед другими методами, т.к. отпадает необходимость заботиться о стабильности белка и сохранности модификаций. Так же к достоинствам данного метода очистки стоит отнести высокую емкость носителя и чистоту получаемых препаратов.


В ходе работы были получены следующие результаты :
1. Рекомбинантные ДНК содержашие кодирующую часть гена Каизо и его БТБ домена, позволяющие нарабатывать белок с 6Гис «хвостами» на С- и N-конце белка.
2. Бакмидные ДНК для получения бакуловируса, экспрессирующего белки описанные в п1. и бакуловирус на их основе.
3. Проэкспрессирован белок Каизо и его БТБ домен и произведена их очистка с применением металл-хелатной хроматографии.
4. Определено положение аминокислотных остатков, по которым и происходит посттрансляционная модификация. .
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники" на 2002-2006 годы

Программное мероприятие

1.9 Проведение молодыми учеными научных исследований по приоритетным направлениям науки, высоких технологий и образования
Продолжительность работ
2013, 2 мес.
Бюджетные средства
3 млн
профинансировано
Продолжительность работ
2009, 7 мес.
Бюджетные средства
1,2 млн
Организация
ООО "Р-сенсорс"
профинансировано
Тема
Разработка миниатюрного детектора параметров движения тела и нижних конечностей человека.
Продолжительность работ
2009, 8 мес.
Бюджетные средства
3 млн
Количество заявок
6
Тема
Изучение взаимосвязи активности мозга с индивидуальными особенностями человека на молекулярно-генетическом уровне.
Продолжительность работ
2008 - 2009, 17 мес.
Бюджетные средства
7,8 млн
Количество заявок
2
Тема
«Разработка технологии масс-спектрометрического скрининга маркерных пептидов для определения белков 18-й хромосомы человека (российская часть международного проекта "Протеом человека")».
Продолжительность работ
2011 - 2013, 31 мес.
Бюджетные средства
282 млн
Количество заявок
1
Тема
Разработка методов определения генетически обусловленной индивидуальной предрасположенности человека к социально значимым заболеваниям.
Продолжительность работ
2011 - 2012, 21 мес.
Бюджетные средства
30 млн
Количество заявок
8
Тема
Разработка метода определения фенотипических характеристик человека, включая пол, группу крови, варианты цвета глаз и волос, по образцу ДНК.
Продолжительность работ
2008 - 2009, 17 мес.
Бюджетные средства
7,8 млн
Количество заявок
2