Получение рекомбинантных белков человека для борьбы с массивными кровопотерями.

1) В ходе патентных исследований было установлено, что оптимальный способ защиты прав интеллектуальной собственности на создаваемые продукты состоит в получении патентов на штамм-продуцент рЧСА GS115/Alb2 и линию-продуцент рФактора VIIa BHK/F7. Составленные патентные заявки направлены в патентное бюро для проверки патентной чистоты защищаемых объектов.
2) Анализ структуры полученных препаратов рЧСА и рФактораVIIа при помощи N-концевого секвенирования и масс-спектрометрии интактных препаратов белков и их триптических гидролизатов показал, что исследованная часть аминокислотных последовательностей полученных белков не имеет отличий от соответствующих стандартов.
3) На основе проведенных в ИБХ РАН лабораторных работ по биосинтезу, выделению и очистке препаратов рЧСА и рФактора VIIа были разработаны и оформлены лабораторные регламенты получения рЧСА и рФактораVIIа. Разработанные регламенты включают только такие технологические процессы, которые могут быть масштабированы для опытно-промышленного получения рЧСА и рФактора VIIа в количествах, достаточных для проведения доклинических и клинических испытаний.
4) В ГУ ГНЦ РАМН были разработаны биологические модели для испытания фармакологических эффектов рЧСА и рФактораVIIа. Созданные биологические модели пригодны для проведения доклинических испытаний препаратов.
5) Был получен и охарактеризован набор гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к фактору VII/VIIа, пригодные для анализа концентрации фактора VII при помощи ИФА и получения иммуносорбентов. Моноклональные антитела наработаны в количествах, достаточных для очистки рФактора VIIa для доклинических испытаний и анализа концентрации рФактора VIIa в ходе биосинтеза и выделения.
6) Был разработан оригинальный метод анализа идентичности, концентрации и уровня родственных примесей для рФактора VIIa при помощи обращеннофазовой ВЭЖХ. Разработанный метод пригоден для рутинного анализа получаемых партий рФактора VIIa.
7) При проведении анализа образцов рЧСА, полученных в соответствии с разработанными лабораторными регламентами, было продемонстрировано, что полученные образцы рЧСА соответствуют количественным требованиям Фармакопейной Статьи для природного ЧСА по критериям: на подлинность (по ГФ-ВЭЖХ), доле мультимеров (по ГФ-ВЭЖХ) и доле фрагментов (по ДСН-ПААГ).

изготовлены опытные образцы рекомбинантных препаратов - человеческого сывороточного альбумина (рЧСА) и фактора VIIa свертывающей системы крови человека (рФактораVIIа) в условиях пилотного производства; проведены контрольные испытания физико-химических характеристик опытных образцов; осуществлен микробиологический и вирусологический контроль образцов рЧСА; проведены доклинические испытания биологической активности опытных образцов препаратов на вновь разработанных биологических моделях; разработаны проекты опытно-промышленных регламентов получения рЧСА и рФактораVIIа.