Разработка технологии изготовления поливалентной, культуральной, концентрированной, инактивированной вакцины для профилактики геморрагической лихорадки с почечным синдромом.

Был изучен спектр чувствительности 7 культур клеток к размножению вирусов Пуумала (штаммы К-27/Уфа-85 и ТКД/Уфа-97) и Добрава (штаммы Аа/Липецк-02 и ТЕА/Липецк-06) – возбудителей геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС). Исследовали три вида первичных: 1) клетки почек сирийских хомяков (КПХ), 2) фибробласты куриных эмбрионов (ККЭ), 3) клетки почек зелёных мартышек (КПЗМ) и 4 вида перевиваемых культур клеток: 1) VERO - линия клеток почек зелёной мартышки, 2) VERO-E6 - линия клеток почек зелёной мартышки, клон Е6, 3) 4647 - линия клеток почек зелёной мартышки, 4) BHK-21 - линия клеток почек сирийского хомяка.
  В результате проведенных исследований наиболее чувствительной к размножению хантавирусов оказалась перевиваемая линия клеток VERO-E6. Максимальные показатели выхода вируса в культуральную жидкость (КЖ) при роллерном культивировании были в 10 раз выше, чем при стационарном и составляли 6,2 lg ФОЕ/мл (для вируса Пуумала) и 6,7 lg ФОЕ/мл (для вируса Добрава). Было показано также, что множественность заражения клеток влияла на сроки максимального выхода вируса в КЖ.
Таким образом, удалось решить проблему изготовления вируссодержащего субстрата, пригодного для конструирования вакцинных препаратов против ГЛПС.

В результате изучения динамики инактивирования хантавирусов Пуумала и Добрава при разных температурных режимах и при обработке разными концентрациями формалина была выбрана наиболее оптимальная схема, включающая инактивирование вируса при температуре 4оС в присутствие 0,025% раствора формалина. Для определения остаточного вируса была разработана методика, включающая проведение 5 серийных пассажей исследуемого субстрата на культуре клеток VERO-E6 с исследованием лизата клеток после каждого пассажа на присутствие вируса и вирусспецифического антигена.
Таким образом, удалось решить проблему инактивации инфекционной активности хантавирусов-кандидатов для использования в последующих исследованиях по конструированию вакцинных препаратов против ГЛПС.

Разработан метод контроля безопасности, включающий проведение 5 серийных пассажей инактивированного субстрата на культуре клеток VERO-E6 с исследованием лизата клеток и культуральной жидкости после каждого пассажа на присутствие вируса с помощью методов МФА и ФОЕ.
  Для определения специфической активности вакцинных препаратов (выявление хантавирусных антигенов) оптимизированы условия применения иммуноферментного анализа (ИФА).
  Удалось решить проблему концентрирования и очистки хантавирусов, а также разработать методы контроля безопасности и специфичности концентрированных препаратов для использования в последующих исследованиях по конструированию вакцины против ГЛПС.

Удалось установить способность приготовленной нами убитой вакцины индуцировать гуморальный иммунный ответ у мышей против вируса Пуумала – основного возбудителя ГЛПС у людей в России.
  Тестирование вакцины с использованием регламентированных методов контроля медицинских иммуно-биологических препаратов (МИБП) показало полное её соответствие требованиям, предъявляемым к МИБП, вводимых людям.
  Научная ценность результатов исследований на отчётном этапе обусловлена получением приоритетных данных в изучении иммунологических характеристик хантавирусов – возбудителей ГЛПС. Впервые, как у нас в стране, так и за рубежом удалось индуцировать гуморальный иммунный ответ против вируса Пуумала у экспериментальных животных.