Белки-биосенсоры как основа для разработки подходов к диагностике заболеваний человека, связанных с повреждением ДНК и нарушением метаболизма селена
Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Проект закончен
Проект
02.512.11.2172
Организация
ИХБФМ СО РАН
Руководитель работ
Ходырева Светлана Николаевна
Продолжительность работ
2007 - 2008, 14 мес.
Бюджетные средства
1,5 млн
Внебюджетные средства
1,5 млн
Информация отсутствует
Этапы проекта
1
01.08.2007 - 31.10.2007
Проведен анализ научно-технической литературы, относящейся к разрабатываемой теме. Сконструированы и синтезированы олигонуклеотиды для создания апуриновых/апиримидиновых ДНК, применяемых в качестве химически активных ДНК-зондов для регистрации исследуемых белков репарации ДНК. Выделены в высокоочищенном состоянии рекомбинантные – поли(АDP-рибозо)полимераза 1 (PARP1) и XRCC1 (белок, входящий в группу комплементации, обусловливающую чувствительность клеток к рентгеновскому излучению). Получен цельноклеточный экстракт из клеток HeLa. Определены эффективности присоединения АП-ДНК различной структуры к очищенной рекомбинантной XRCC1. Показано, что АП-ДНК с одноцепочечными разрывами обеспечивают большие уровни модификации белка. Определены эффективности присоединения АП-ДНК, содержащих напротив АП-сайта ненуклеотидные вставки, имитирующие АП-сайт, к очищенной рекомбинантной PARP1 и влияние апуриновой/апиримидиновой эндонуклеазы 1 на этот процесс. Определены эффективности присоединения АП-ДНК различной структуры к Ku80 субъединице к Ku-антигена в экстракте из клеток HeLa. На основании полученных данных сделаны предварительные выводы о структуре оптимальных АП-ДНК-зондов.
2
01.11.2007 - 31.12.2007
За отчётный период проведён расчёт и созданы ДНК-конструкции, позволяющих синтезировать модельные РНК-транскрипты, содержащие фрагмент мРНК, включающий селеноцистеиновый кодон, SECIS-элемент и спейсерную часть между ними, различающиеся природой SECIS-элемента и длиной спейсерной части. Изучено связывание модельных РНК с изолированными рибосомами человека и с рибосомами в составе бесклеточной белок-синтезирующей системы из ретикулоцитов кролика в присутствии белка SBP2. Выбраны оптимальные условия связывания (концентрации компонентов и ионов Mg2+ и состав буфера).
3
01.01.2008 - 31.10.2008
Разработаны ДНК-зонды для поиска мутаций в районе гена белка SBP2, который соответствует участку связывания белка с 60S рибосомной субчастицы.
  В ходе выполнения проекта проведены ориентированные фундаментальные исследования, направленные на создание и применение методов тестирования статуса систем репарации ДНК в клетках человека в норме и при патологии.
  В ходе выполнения проекта проведены ориентированные фундаментальные исследования, направленные на создание и применение методов тестирования статуса систем репарации ДНК в клетках человека в норме и при патологии.
Программа
Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2013 годы"
Программное мероприятие
1.2 Проведение проблемно-ориентированных поисковых исследований и создание научно-технического задела по технологиям в области наук о жизни
Продолжительность работ
2009 - 2010, 15 мес.
Бюджетные средства
6,2 млн
профинансировано
Продолжительность работ
2007, 4 мес.
Бюджетные средства
1,5 млн
Организация
Физический факультет МГУ
профинансировано
профинансировано
Продолжительность работ
2011 - 2013, 25 мес.
Бюджетные средства
6,9 млн
Организация
Химический факультет МГУ
профинансировано
профинансировано