Изучение молекулярного контроля биосинтеза цефалоспорина С в мицелиальном грибе Aсremonium сhrysogenum

Установлено, что научно-технический задел по теме проекта патентно-чист и способен к патентной охране в Российской Федерации и за рубежом.
Отработаны параметры культивирования в лабораторных условиях промышленного и «дикого» штаммов A.chrysogenum – продуцентов цефалоспорина С, мониторинга продукции цефалоспорина.

Выделены гены A.chrysogenum, кодирующие ключевые белки биосинтеза и транспорта цефС – экспандазу cefEF, превращающую пенициллин N в деацетоксицефалоспорин С с последующим гидроксилированием до дезацетилцефалоспорина
  Сконструированы «кассеты экспрессии» гена cefEF и гена, кодирующего N-концевой гибрид cefT с желтым флуоресцентым белком YFP под контролем промотора gpdA A.nidulans.
  Разработан протокол агробактериальной трансформации промышленного штамма A.chrysogernum- суперпродуцента цефС , впервые показано, что TEF1 промоторы A. gossyppii и S. cerevisiae функционируют и в клетках A. chrysogenum.

Результаты работы на отчетном этапе, в том числе: разработанные виды продукции (веществ / устройств / программных продуктов / технологий / методов и результатов исследований) с указанием их характеристик, полученных, в том числе, по результатам испытаний, оценка соответствия этих характеристик требованиям технического задания.
  Установлено, что одним из основных параметров процесса биосинтеза цефалоспорина С является особенность роста биомассы и массообменные характеристики оборудования.
  Установлено, что повышенная продукция цефС у штамма №26/8 скорее всего связана не со структурными особенностями исследованных генов биосинтеза цефС, а с характером их регуляции.
Установлено, что штамм A.chrysogenum №26/8 отличается двукратным увеличением копийности «ранних» генов pcbAB/pcbC по сравнению со штаммом ATCC11550.

  Впервые выявлены принципиальные различия в морфологии и структуре клеточных стенок у промышленного и «дикого» штаммов A.chrysogernum- суперпродуцента цефС .

Получены митотически-стабильные гигромицин-устойчивые интегративные трансформанты штаммов A.chrysogenum №26/8 и ATCC11550, плазмидами, несущими кассеты экспрессии генов cefEF и cefT A.chrysogenum.

Осуществлено культивирование полученных рекомбинатных штаммов A.chrysogenum, проведен анализ продукции цефС в полученных рекомбинантных штаммах A.chrysogenum АТСС11550 и №26/8.

Подготовлена технико-экономическая оценка рыночного потенциала полученных рекомбинантных штаммов A.chrysogenum. Разработан проект ТЗ на проведение опытно-технологических работ по масштабированию культивирования и оптимизации параметров биосинтеза цефалоспорина с помощью полученных рекомбинантных штаммов A.chrysogenum.