Разработка метода молекулярного мониторинга распространения вирусных инфекций и определения активности противовирусных соединений с целью создания терапевтических препаратов нового поколения

1.1. Анализ литературы и разработка общей методики для создания прототипа модельной системы вирус-клетка.
1.2. Выбор репликационно-компетентного ретровируса с наибольшей гомологией к патогенным гамма-ретровирусам, выделяемым из опухолевых клеток аденомы простаты человека и клеток крови больных синдромом привычной усталости.
1.3. Конструирование рекомбинантного ДНК-генома репликационно-компетентного гамма-ретровируса.
1.4. Встаривание в рекомбинантный ДНК-геном репликационно-компетентного гамма-ретровируса последовательности маркёрного гена усиленного зеленого флуоресцирующего белка (eGFP).
1.3. Получение инфекционных ретровирусных частиц, содержащих рекомбинантный геном гамма-ретровируса.
1.4. Проведение патентных исследований по ГОСТ 15.011-96.

2.1. Клонирование гена обратной транскриптазы теломеразы человека в вектор для получения инфекционных ретровирусных частиц, содержащий ген GFP.
2.2. Получение инфекционных ретровирусных частиц, содержащих ген обратной транскриптазы теломеразы человека.
2.3 Выбор перевиваемых клеток-мишеней, обеспечивающих нормальное прохождение жизненного цикла (размножения) полученного рекомбинантного вируса.
2.4 Определение оптимальных условий для эффективного распространения этого вируса в популяции клеток in vitro.
2.5 Получение перевиваемых клеток- мишеней содержащих рекомбинантный геном гамма-ретровируса и продуцирующих рекомбинантные вирусные частицы, несущие маркерный ген eGFP.
2.6. Получение перевиваемых клеток-мишеней содержащих ген обратной транскриптазы теломеразы человека.

3.1 Разработка общей методики подавления развития ретровирусной инфекции с помощью РНК интерференции.
3.2 Разработка и синтез интерферирующих РНК (siРНК), обладающих антиретровирусной активностью.
3.3 Испытание антивирусной активности полученных интерферирующих РНК и оценка возможности создания на их основе лентивирусных векторов, направляющих в клетках, синтез специфических шпилечных РНК (shРНК) – предшественников эффективных siРНК.
3.4 Разработка программы внедрения результатов НИР в образовательный процесс.
3.5. Разработка общей методики подавления активности теломеразы с помощью РНК интерференции.
3.6. Разработка и синтез интерферирующих РНК (siРНК), обладающих ингибирующей теломеразу активностью.

4.1 Создание модельных клеток, в которых постоянно осуществляется синтез специфических shРНК, обуславливающих невосприимчивость таких клеток к заражению ретровирусом.
4.2. Создание модельных клеток, в которых постоянно осуществляется синтез специфических shРНК, обуславливающих пониженный уровень теломеразнорй активности.
4.3. Конструирование лентивирусных векторов, направляющих в клетках, синтез специфических шпилечных РНК (shРНК) – предшественников эффективных антивирусных siРНК – ингибиторов теломеразной активности.

5.1. Оптимизация структуры выбранных ингибиторов и их препаративный синтез.
5.2. Синтез и определение антиретровирусной и антираковой активности новых соединений с предполагаемым антивирусным потенциалом.
5.3. Анализ биологической активности этих соединений.
5.4. Разработка научно-методических материалов для курса лекций «Генная и клеточная терапия. Вирусные системы переноса и экспрессии генов с помощью вирусных векторов».
5.5. Разработка научно-методических материалов для практических занятий по курсу «Основы культивирования клеток млекопитающих и методы переноса и экспрессии генов в перевиваемые клетки».

6.1. Конструирование прототипа экспресс-системы скрининга и оценки эффективности соединений, направленных на подавление активности обратной транскриптазы вируса СПИДа (ВИЧ), как исходной формы, так и ВИЧ с множественной лекарственной устойчивостью.
6.2. Конструирование прототипа системы скрининга подавления активности обратной транскриптазы теломеразы человека.
6.3. Обобщение проведенных экспериментов и оформление публикаций.
6.4. Синтез и проверка анти-ВИЧ активности соединений, способных служить основой для современных антиспидовых средств нового поколения.
6.5. Синтез и проверка активности соединений ингибирующих теломеразу, способных служить основой для современных антираковых препаратов.