Регистрация / Вход
Прислать материал

Нейрональный депо-управляемый вход кальция как новая мишень в терапии нейродегенеративных заболеваний

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Проект закончен
Проект
02.740.11.5007
Организация
ИНЦ РАН
Руководитель работ
Безпрозванный Илья Борисович

Информация отсутствует

Этапы проекта

1
20.07.2009 - 31.10.2009
Проведен сравнительный анализ двух типов клеток нейробластомы человека, показавший преимущества клеток SK-N-SH перед клетками Neuro-2A как в условиях культивирования, так и в экспериментах по исследованию депо-управляемого входа кальция.
Подобраны оптимальные условия культивирования клеток, а также показано, что поли-L-лизин является лучшим адгезивным субстратом для клеток нейробластомы человека SK-N-SH.
Проведены исследования депо-управляемого входа кальция на клеточных линиях нейробластомы человека. Анализ данных, полученных путем флуоресцентного измерения внутриклеточной концентрации кальция и электрофизиологическими методами, показал, наличие депо-управляемых кальциевых каналов в клетках нейробластомы человека SK-N-SH, тогда как в клетках Neuro-2A наблюдаемый вход кальция имел значения в 4 раза меньшие, чем на клетках SK-N-SH.
Разработаны методики получения модельных линий болезни Гентингтона (БГ) и болезни Альцгеймера (БА) на основе клеточной линии нейробластомы человека SK-N-SH. Клеточные модели БГ и БА были получены путем временной трансфекции клеток SK-N-SH плазмидами кодирующими мутантные белки, определяющие наследственное развитие данных нейродегенеративных заболеваний. Для модели БГ сконструированная плазмида несла ген гентигтина с 138 глутаминовыми остатками. Для моделей БА плазмиды несли гены пресенилина-1 с мутацией M146V (Метионин в положении 146 заменен на Валин) и делецией ΔE9 (делеция в 9 экзоне).
Проведенные работы и полученные результаты полностью соответствуют требованиям задания.
Развернуть
2
01.11.2009 - 15.12.2009
Проведены исследования депо-управляемого входа кальция на полученной клеточной модели болезни Гентигтона. Депо-управляемый вход кальция оценивали, используя измерения интегральных токов через мембрану целой клетки в условиях локальной фиксации потенциала (метод whole-cell).
Показано, что аномальный кальциевый сигнал, увеличение величины входящего тока в 5 раз, наблюдаемый в клетках моделирующих БГ (Htt138Q) может быть обусловлен возрастанием величины депо-управляемого тока.
Определено, что увеличение депо-управляемого тока в клеточной модели БГ происходит за счет усиления экспрессии каналообразующих белков.
Проведены исследования депо-управляемого входа кальция на полученной клеточной модели болезни Альцгеймера. Депо-управляемый вход кальция оценивали, используя методы как измерения внутриклеточной концентрации Ca2+ флуоресцентным мембранопроникающим кальциевым зондом, так и измерения интегральных токов через мембрану целой клетки в условиях фиксации потенциала (метод whole-cell).
Оба независимых метода показали значимое (порядка 50%) уменьшение депо-управляемого входа кальция в модели БА.
Руководителем проекта проведен семинар на тему «Общие основы развития нейродегенеративных заболеваний». Название представленного доклада: «Нейрональная кальциевая сигнализация и нейродегенеративные заболевания». На семинаре присутствовало 57 человек (сотрудники Института цитологии РАН, аспиранты ИНЦ РАН, студенты СПбГУ и СПбГТУ).
Проведенные работы и полученные результаты полностью соответствуют требованиям задания.
Развернуть
3
01.01.2010 - 15.05.2010
Разработка методик выделения срединных шипиковых нейронов стриатума (М8К) и нейронов гиппокампа мышей, с последующим получением первичных клеточных линий;
Разработка протоколов получения
нейрональных мышиных моделей
БА и БГ;
Проведение научного семинара
приглашенным руководителем по
теме «Основы и методы разработки клеточных и животных моделей заболеваний»
Развернуть
4
15.05.2010 - 05.09.2010
Проведение исследований депо-
управляемого входа кальция на
контрольных нейронах и нейрональных моделях БГ и БА, анализ полученных результатов, сравнение результатов,
полученных на контрольных и
модельных нейронах;
Проведение работ по
тестированию фармакологических
агентов (EVP), потенциальных
ингибиторов депо-управляемого
входа кальция в МSN;
Разработка программы внедрения
результатов НИР в образовательный процесс; Проведение патентных исследований;
Проведение научного семинара
приглашенным руководителем по
теме «Болезнь Альцгеймера и Болезнь Гентингтона - перспективы развития
терапевтической базы»
Развернуть

Программа

Программа "Научные и научно-педагогические кадры инновационной России" на 2009 - 2013 годы

Программное мероприятие

1.5 Проведение научных исследований коллективами под руководством приглашенных исследователей
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
3,02 млн
Организация
ИНЦ РАН
профинансировано
Продолжительность работ
2011 - 2012, 15 мес.
Бюджетные средства
6,4 млн
профинансировано
Продолжительность работ
2012 - 2013, 14 мес.
Бюджетные средства
3,12 млн
Организация
ИОГен РАН
профинансировано
Тема
Создание методов генной и клеточной терапии нейродегенеративных заболеваний.
Продолжительность работ
2011 - 2012, 21 мес.
Бюджетные средства
18 млн
Количество заявок
5
Тема
Выявление новых молекулярных мишеней для антицитокиновой терапии иммунозависимых заболеваний кожи.
Продолжительность работ
2011 - 2012, 15 мес.
Бюджетные средства
24 млн
Количество заявок
3
Тема
Исследование молекулярных процессов, лежащих в основе нейродегенеративных заболеваний.
Продолжительность работ
2011 - 2012, 21 мес.
Бюджетные средства
30 млн
Количество заявок
12
Тема
Генно-инженерные технологии получения препаратов, управляющих активностью клеток иммунной системы, для применения в терапии гепатитов и онкологических заболеваний
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
10 млн
Количество заявок
0
Тема
Создание препаратов, стимулирующих шаперонную функцию клетки и предназначенных для терапии нейродегенеративных патологий.
Продолжительность работ
2008 - 2009, 17 мес.
Бюджетные средства
7,8 млн
Количество заявок
2