Регистрация / Вход
Прислать материал

Использование методов поляризационной спектрофлуорометрии и изотермической титрационной калориметрии для создания и оптимизации нановакцинных препаратов нового поколения

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Проект закончен
Проект
02.740.11.5088
Организация
ДВФУ
Руководитель работ
Шныров Валерий Леонидович

Информация отсутствует

Участники проекта

Зам. руководителя работ
Костецкий Эдуард Яковлевич

Этапы проекта

1
05.10.2009 - 15.12.2009
Краткое описание выполненных работ
На первом этапе выполнения работ по госконтракту, согласно требованиям Технического задания и Календарного плана были проведены следующие работы:
1. Заготовлено сырью кукумарии японской, 8 видов морских макрофитов и 4 видов морских беспозвоночных для выделения тритерпеновых гликозидов, гликолипидов и фосфолипидов, соответственно. При этом 3 вида морских макрофитов и 4 вида морских беспозвоночных заготовлены сверх задания с целью поиска дополнительных перспективных объектов для дальнейших исследований.
2. Выделены в хроматографически чистом виде моногалактозилди-глицериды (МГДГ) из 5 видов морских макрофитов. Подтверждена их химическая структура с помощью ЯМР, хромато-масс-спектрометрии и ГЖХ.
3. Дополнительно проведен анализ ЖК состава общих, полярных и нейтральных липидов у 3 видов бурых ворослей.
4. Дополнительно выделены в хроматографически чистом виде фосфатидилхолин (ФХ) и фосфатидилэтаноламин (ФЭ) из 4 видов морских беспозвоночных и установлен их ЖК состав.
5. Выделен в хроматографически чистом виде тритерпеновый гликозид из кукумарии японской кукумариозид А2-2 и подтверждена его химическая структура с помощью ЯМР и хромато-масс-спектрометрии.
6. Проведена наработка биомасса Yersinia pseudotuberculosis для выделения субъединичного поринового белка и проведено выделение этого белка в виде триммера и мономера.
7. Исследована адъювантная активность полученных образцов на экспериментальных животных.
8. Дополнительно исследована гемолитическая активность моногалактозилдиглицеридов и фосфолипидов из ряда морских беспозвоночных.
9. Проведено теоретическое и практическое обучение приглашенным специалистом работе на микрокалориметре VP-ITS и поляризационном спектрофлуориметре PCI.
10. Проведен научно-практический семинар на тему «Микрокалориметрия и флуоресцентная спектроскопия при изучении липид белковых систем».
Развернуть
2
01.01.2010 - 30.04.2010
1. Выбраны оптимальные условия для получения иммуностимулирующих комплексов и исследования их структуры с помощью электронной микроскопии.
• Выбрано наиболее эффективных соотношений между гликолипидами и сапонинами, которые обеспечивают максимальную однородность формирования иммуностимулирующих ТИ-комплексов. Соотношение компонентов в системе ТИ-комплекса КД:холестерин:МГДГ (6:2:4), обеспечивает наиболее эффективное формирование трубчатых наночастиц, являющихся носителями антигенов и исключает образование каких-либо других частиц (МГДГ, КД, Холл);
• Вполне допустимы системы состава КД:ХОЛ:МГДГ (6:2:4-6);
• Найдено оптимальное разбавление исходного ТИ-комплекса КД:ХОЛ:МГДГ (6:2:4) фосфатно-солевым буфером в 10 раз перед иммунизацией животных. Это позволяет сохранить структуры трубчатых наночастиц комплекса. Увеличение разбавления ведет к разрушению трубчатых наночастиц ТИ-комплекса;
• Полученные экспериментальные данные позволяют получить пригодный для внедрения в практику иммунологический ТИ-комплекс, существенно улучшенный путем оптимизации соотношения компонентов его структуры;
• Подтвержден механизма регуляции иммуногенности белкового антигена через изменение конформации порина МГДГ с различным составом жирных кислот с помощью метода спектрофлюоресценции;
2. Исследована шаперонная функция гликолипидов с различным составом жирных кислот относительно конформации белка-антигена методом флуоресцентной спектроскопии.
• Методом спектрофлюоресценции показано, что добавление МГДГ с различным составом жирных кислот к тримеру порина приводит к заметным изменениям третичной структуры порина, что проявляется в отчетливом повышении интенсивности флюоресценции и длинноволновом сдвиге максимума флуоресценции по сравнению со свободным порином. Те липиды, которые давали наибольший иммуностимулирующий эффект (МГДГ из S. pallidum и U. fenestrata) в наименьшей степени способствуют увеличению интенсивности флуоресценции белка-антигена и наибольшему длинноволновому сдвигу максимума интенсивности флуоресценции порина;
• Полученные результаты подтверждают возможность целенаправленно управлять иммуногенностью и конформацией белкового антигена в составе иммуностимулирующих комплексов с помощью изменения липидного окружения антигена.
Развернуть
3
01.05.2010 - 30.08.2010
1. Проведены научные семинары приглашенным специалистом совместно с сотрудниками и студентами отделения
2. Исследована шаперонная функция гликолипидов с различным составом жирных кислот относительно конформации белка-антигена методом изотермической титрационной и дифференциальной сканирующей микрокалориметрии.
3. Исследована шаперонная функция МГДГ и тритерпеновых гликозидов в составе иммуностимулирующих комплексов с субъединичным белком-порином
4. Проверена иммунологическая активность полученных иммуностимулирующих комплексов на экспериментальных животных
5. Проведены патентные исследования
6. Разработаны программы внедрения результатов НИР в образовательный процесс
7. Обобщены полученные результаты, оформлен патент и подготовлен итоговый научный отчет.
Развернуть

Программа

Программа "Научные и научно-педагогические кадры инновационной России" на 2009 - 2013 годы

Программное мероприятие

1.5 Проведение научных исследований коллективами под руководством приглашенных исследователей
Продолжительность работ
2010 - 2012, 26 мес.
Бюджетные средства
7,05 млн
Организация
ИНК РАН
профинансировано
Тема
Создание универсальной постгеномной технологии для разработки нового поколения лекарственных препаратов.
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
120 млн
Количество заявок
11
Тема
Разработка прототипов рекомбинантных онколитических препаратов нового поколения на основе вирусов.
Продолжительность работ
2013, 8 мес.
Бюджетные средства
30 млн
Количество заявок
6
Тема
Разработка технических решений по оптимизации теплофикационной паротурбинной установки нового поколения.
Продолжительность работ
2013, 8 мес.
Бюджетные средства
30 млн
Количество заявок
5
Тема
Разработка новых методов изотермической амплификации нуклеиновых кислот в реальном времени и их использование в фундаментальных и прикладных исследованиях.
Продолжительность работ
2008, 3 мес.
Бюджетные средства
1,2 млн
Количество заявок
1
Тема
Создание синтетических регуляторов активности клеточных белков на основе синтетических аналогов нуклеиновых кислот для конструирования биомедицинских препаратов и диагностикумов нового поколения.
Продолжительность работ
2008, 3 мес.
Бюджетные средства
1,2 млн
Количество заявок
2