Регистрация / Вход
Прислать материал

Разработка градиентного латерального проточного иммуноанализа для определения прокальцитонина в сыворотке крови человека

ФИО: Серебренникова К.В.

Направление: Биотехнологии (У.М.Н.И.К.)

Институт: Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова

Кафедра: Кафедра Химической энзимологии

Академическая группа: аспирант

Одной из актуальных проблем медицинской диагностики являются своевременное выявление сепсиса и бактериальных инфекции. По результатам исследований последних лет наиболее перспективным маркером сепсиса является прокальцитонин (ПКт), его свойства позволяют проводить дифференциальную диагностику бактериального и небактериального воспаления, оценивать тяжесть состояния больного и эффективность проводимого лечения.

При системном воспалении бактериальной этиологии в течение 6–12 часов концентрация ПКт резко возрастает. Уровень концентрации ПКт от 0,05 до 0,5 нг/мл обычно интерпретируется как патологический, подтверждающий наличие локальной бактериальной инфекции. Значения концентраций ПКт от 0,5 до 2 нг/мл указывают на наличие системной инфекции, но еще не дают основания с уверенностью ставить диагноз «сепсис». Для уточнения диагноза в этих случаях определение ПКт рекомендуется повторить через 6–24 часа. Содержание ПКт выше 2 нг/мл с высокой вероятностью свидетельствует об инфекционном процессе с системным воспалением, приводящем к сепсису. Концентрация ПКт более 10 нг/мл (максимально до 1000 нг/мл) наблюдается исключительно у пациентов с тяжелым сепсисом или септическим шоком. Ежедневные измерения уровня концентрации ПКт дают информацию о течении заболевания и позволяют прогнозировать исход сепсиса. Повышенное содержание ПКт в течение продолжительного времени свидетельствует о неблагоприятном течении заболевания.

В настоящее время одним из наиболее распространенных методов определения диагностически важных биологических активных веществ является иммунохроматографический анализ, также известный как латеральный проточный иммуноанализ. Данный вид анализа осуществляется при помощи специальных тест-полосок, которые обеспечивают быстроту проведения тестирования. Реакция протекает в один этап, так как данные тест-системы содержат все компоненты в готовом виде, остается только добавить анализируемый образец. Результат анализа выявляется в виде окрашенных полос в тестовой и контрольной зонах аналитической мембраны. Основными преимуществами данного метода являются экспрессность, простота в использовании и визуальная детекция результатов анализа.

В большинстве случаев для проведения латерального проточного иммуноанализа в качестве детектирующего агента используют комплекс антител с коллоидным золотом. Преимущество коллоидного золота в качестве метки определяется легкостью получения частиц заданного размера, а также хорошей чувствительностью определения с помощью таких комплексов. Квантовые точки – новый класс меток для латерального проточного иммуноанализа. Квантовые точки представляют собой нанокристаллы неорганических полупроводниковых материалов диаметром 1–10 нм. Основными преимуществами квантовых точек являются возможность с помощью одного источника излучения возбуждать нанокристаллы разных цветов, высокая яркость флуоресценции и высокая фотостабильность. Такие уникальные свойства квантовых точек делают их идеальным средством для сверхчувствительной многоцветной регистрации биологических объектов, а также для медицинской диагностики.

В рамках данного проекта планируется разработать экспресс-метод определения прокальцитонина в сыворотке крови человека на основе принципа градиентного латерального проточного иммуноанализа с использованием различных меток биоспецифических компонентов. Данная тест-система предназначена для полуколичественного иммунохроматографического анализа. Главное отличие такой системы от традиционного латерального проточного иммуноанализа состоит в формировании от 2 до 10 дискретных параллельных тестовых линий путем предварительного нанесения на мембрану растворов вторых специфических моноклональных антител против определяемого соединения, причем концентрация антител последовательно возрастает от линии к линии. Соответственно, по количеству проявляемых полос на аналитической мембране можно осуществлять полуколичественную оценку результатов.