Регистрация / Вход
Прислать материал

Разработка системы нового формата для пробоподготовки цельной крови на основе технологии сухих пятен для определения лейкоза крупного рогатого скота методами ИФА и ПЦР

ФИО: Саушкин Н.Ю.

Направление: Биотехнологии (У.М.Н.И.К.)

Научный руководитель: к.х.н., доц. Осипов А.П. и с.н.с., к.х.н. Самсонова Ж.В.

Институт: Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова

Кафедра: Кафедра Химической энзимологии

Академическая группа: аспирант

В последние годы технология сухих пятен крови (СПК) находит все более широкое применение в диагностических целях для медицины. Данная технология основана на капельном нанесении образца исследуемой биологической жидкости на специальную мембрану с последующим высушиванием на воздухе. Метод СПК имеет ряд преимуществ по сравнению с традиционным отбором крови и нашел широкое применение в медицине. Его можно использовать для пробоподготовки в «полевых» условиях и доставлять образцы в лабораторию без использования холодовой цепи, что делает метод СПК привлекательным для применения в области ветеринарии. Сухие образцы крови отличаются высокой стабильностью при хранении. Малый объем отбираемого материала снижает инвазивность процесса отбора крови по сравнению с традиционным.

Предложен новый формат мембранного носителя для прободподготовки, транспортировки, хранения и анализа сухих пятен биологических жидкостей. Образец исследуемой жидкости наносят на специальную пористую мембрану, выполненную в виде тонкой полоски с нанесенной маркировкой. Полоска (60·5 мм2) изготовлена из гидрофильного мембранного материала и приклеена к краю карточки таким образом, что в сложенном виде устройство представляет собой конверт, полностью закрывающий полоску для нанесения биоматериала. Каждый конверт упаковывают в пластиковый пакет zip-lock с осушителем. При хранении и транспортировке карточки исключается перекрестная контаминация и воздействие окружающей среды на образцы. Каждая карточка имеет несколько полей для внесения необходимой информации об отобранном образце, такие как дата отбора, идентификатор (кличка), номер и т.д. На обратной стороне карточки указана краткая инструкция по работе с устройством, исключающая основные неточности в работе персонала при отборе проб. Жидкость равномерно распределяется вдоль мембраны под действием капиллярных сил. После высушивания необходимую для анализа часть мембраны определенной площади отделяют с использованием ножниц. На основании изучения физико-химических свойств мембранных материалов можно осуществлять выбор носителей для получения образцов в виде сухих пятен и последующего анализа в целях лабораторной диагностики. Разрабатываемое устройство может способствовать импортозамещению традиционно используемых целлюлозных карточек для капельного получения сухих образцов крови, производимых в зарубежных странах. Поскольку сухие образцы крови можно получать в «полевых» условиях, например, в хозяйствах, с последующей транспортировкой в диагностическую лабораторию без использования специальных температурных условий, применение данной технологии в ветеринарии является перспективной для решения мониторинговых задач.

Лейкоз крупного рогатого скота (КРС) – хроническая ретровирусная инфекционная болезнь с длительным латентным периодом. Для диагностики лейкоза у КРС применяют, в основном, серологические методы, например, иммуноферментный анализ (ИФА). Эти методы позволяют косвенным образом определить заболевание по наличию специфических антител на белки вируса. Вследствие латентного протекания болезни антитела вырабатываются в крови животного только спустя 2-8 недель после заражения, что не позволяет вовремя идентифицировать заболевание и изолировать особь. С целью ускорения оздоровления стад используется метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), который позволяет напрямую выявлять провирусную ДНК в образце крови животного. Разрабатываемые в проекте методы ИФА и ПЦР для выявления лейкоза КРС с использованием сухих образцов крови являются новыми и аналоги в литературе не описаны.