Регистрация / Вход
Прислать материал

Выявление минимальной остаточной болезни при лейкозах посредством детекции одиночных молекул химерных РНК-онкомаркеров.

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Выполнение этапа проекта
Проект
02.434.11.3024
Организация
ИБ РАН
Продолжительность работ
2005 - 2006, 13 мес.
Бюджетные средства
6 млн
Внебюджетные средства
0 млн

создание метода детекции одиночных молекул РНК заданного вида в образцах крови и костного мозга и его применение для надежного выявления минимальной остаточной болезни у больных лейкозами, ассоциированными с хромосомными перестройками и синтезом химерных мРНК

Этапы проекта

1
20.09.2005 - 08.12.2005
Разработана методика обнаружения молекул химерной мРНК AML1-ETO и определения их числа с помощью метода молекулярных колоний. Также разработан способ консервации образцов крови и костного мозга, исключающий деградацию РНК, и способы выделения нуклеиновых кислот из крови и костного мозга, позволяющие выделять как сумму ДНК и РНК, так и только РНК с выходом, близким к 100%. Таким образом, разработаны базовые процедуры, необходимые для обнаружения минимальной остаточной болезни в клинических образцах.
В то же время, процент выявления молекул РНК пока еще ниже, чем требуется техническим заданием. С целью увеличения чувствительности обнаружения молекул РНК, в дальнейшем, необходимо оптимизировать стадию обратной транскрипции.
Полученные результаты могут быть использованы в клинических лабораториях для консервации образцов крови и костного мозга, а также для выделения нуклеиновых кислот из таких образцов во всех случаях, где требуется выделение чистых недеградированных ДНК и РНК с высоким выходом, в том числе для диагностики рака и инфекционных заболеваний посредством анализа генетического материала с помощью ПЦР или ОТ-ПЦР.
Развернуть
2
01.01.2006 - 30.06.2006
За отчетный период оптимизирована реакция обратной транскрипции, благодаря чему удалось поднять выход синтеза кДНК до 50%, что обеспечивает чувствительность диагностики 2 молекулы химерной мРНК AML1-ETO, как и определено техзаданием. В процессе работы установлен ранее неизвестный факт, что обратнотранскриптазная активность ДНК-полимеразы из Thermus thermophilus специфически подавляется большими количествами РНК и ДНК. Установление этого факта позволяет дать общую рекомендацию не использовать Tth ДНК-полимеразу для определения РНК-мишеней с низким титром, так как это с высокой вероятностью может привести к ложноотрицательному результату диагностики.
Также, за отчетный период разработан метод обнаружения молекулярных колоний посредством гибридизации с флуоресцентными зондами на нейлоновых фильтрах, в том числе с использованием явления резонансного переноса энергии. Предложенные усовершенствования в методике гибридизации позволяют значительно упростить процедуру и многократно сократить время, необходимое для осуществления анализа. Использование для гибридизации двух разноокрашенных флуоресцентных зондов, а также гибридизация с парой зондов, способных к резонансному переносу энергии, позволяет различать молекулярные колонии, образованные химерными и нехимерными последовательностями, и тем самым существенно повысить специфичность диагностики.
Таким образом, задачи, определенные в техзадании для отчетного периода, выполнены полностью.
Полученные результаты могут быть широко использованы в клинических лабораториях, в том числе для диагностики рака и инфекционных заболеваний посредством анализа генетического материала с помощью ПЦР или ОТ-ПЦР.
  Все примененные подходы и полученные результаты являются оригинальными и превосходят существующий мировой уровень.
Развернуть
3
01.07.2006 - 31.10.2006
За отчетный период создана полная диагностическая процедура, включающая в себя новый способ консервации биологических образцов, усовершенствованный метод выделения нуклеиновых кислот из клинических образцов. Разработанная диагностическая процедура позволяет обнаруживать одиночные молекулы мРНК AML1-ETO в крови и костном мозге человека. Разработаны контрольные тесты, способные проверить надежность и достоверность полученных результатов.
Разработанная диагностическая процедура испытана путем определения абсолютного титра мРНК AML1-ETO в клинических образцах, взятых у больных данным типом лейкоза на разных стадиях заболевания. Показано, что появление онкомаркера в крови и костном мозге пациентов, находящихся на стадии ремиссии, удается обнаружить за несколько месяцев до всплеска его титра, что может быть использовано для своевременного проведения повторного цикла химиотерапии. Разработанная процедура позволит повысить эффективность лечения лейкозов и, следовательно, понизить стоимость лечения онкологических больных и существенно снизить смертность. Базис данной технологии может быть использован для скрининга банков крови, выявления генетических аномалий эмбрионов путем анализа крови матери на ранней стадии беременности, экологического мониторинга, выявления следовых количеств генетически модифицированных продуктов в пище и криминалистической экспертизы.
Благодаря своим уникальным характеристикам данная технология сможет, в случае внедрения, успешно конкурировать (как на внутреннем, так и на мировом рынке) с существующими способами молекулярной диагностики с помощью иммунохимических методов и традиционной ОТ-ПЦР, в том числе ОТ-ПЦР в реальном времени. При массовом внедрении новой технологии цена одного теста может составить 300-600 руб., а число тестов в масштабах страны может составить десятки миллионов в год.
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники" на 2002-2006 годы

Программное мероприятие

1.2 Проблемно-ориентированные поисковые исследования фундаментального характера
Продолжительность работ
2012 - 2013, 13 мес.
Бюджетные средства
0,68 млн
профинансировано
Продолжительность работ
2014 - 2016, 30 мес.
Бюджетные средства
25 млн
Организация
ИБР РАН
профинансировано
Тема
Выявление минимальной остаточной болезни при лейкозах посредством детекции одиночных молекул химерных РНК-онкомаркеров
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
6 млн
Количество заявок
2
Тема
Разработка полупроводниковых детекторов одиночных фотонов для длины волны оптоволоконного стандарта связи
Продолжительность работ
2015 - 2016, 14 мес.
Бюджетные средства
40 млн
Количество заявок
2
Тема
Разработка метода оценки риска возникновения острых сосудистых состояний и выявление показаний для их терапии у больных ишемической болезнью сердца и заболеваниями сосудов мозга на основе определения интенсивности свободнорадикальных процессов
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
3 млн
Количество заявок
3
Тема
Разработка перспективной малоэмиссионной камеры сгорания для энергетических ГТУ.
Продолжительность работ
2007 - 2009, 25 мес.
Бюджетные средства
105 млн
Количество заявок
1
Тема
Создание методов сопряжения сигналов мозга здорового и больного человека с компьютером для обеспечения невербальной коммуникации.
Продолжительность работ
2008 - 2009, 17 мес.
Бюджетные средства
18 млн
Количество заявок
5