Регистрация / Вход
Прислать материал

Выполнение исследования свободных и связанных с поверхностью клеток крови циркулирующих нуклеиновых кислот методом флюоресцентной in siti гибридизации на метафазных хромосомах человека.

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Выполнение этапа проекта
Проект
02.444.11.7151
Организация
ИХБФМ СО РАН

Проведение стажировок молодыми учеными и преподавателями в российских научно-образовательных центрах.

Соисполнители

Организация
Томский НИМЦ

Этапы проекта

1
27.10.2005 - 25.11.2005
Основные результаты, полученные в ходе выполнения настоящего исследования следующие:
Развитие методов генной терапии, создание трансгенных организмов, исследования в области вирусной онкологии привели к накоплению данных о реальности существования процесса обмена нуклеиновыми кислотами между эукариотическими клетками и окружающей средой. Свободные нуклеиновые кислоты обнаруживаются в циркуляции (плазме крови) у здоровых людей; при некоторых заболеваниях (аутоиммунные заболевания, опухоли), содержание ДНК в сыворотке заметно возрастает. Показано, что эукариотические клетки секретируют в среду определенное количество ДНК и РНК, о биологических функциях которых пока можно только догадываться. Доказано существование природных механизмов транспорта нуклеиновых кислот в клетки, таких как рецептор-опосредованный эндоцитоз свободной ДНК, а также фагоцитоз апоптозных структур. Проникновение в клетки чужеродной ДНК и РНК может приводить к изменениям в генетических программах клетки. Известно, что встраивание в геном эукариотических клеток вирусной ДНК приводит к их онкотрансформации. Недавно показано, что не только вирусная ДНК, но и ДНК опухолевых клеток, поглощенная нормальными фибробластами посредством фагоцитоза, может приводить к их онкотрансформации in vitro и образованию опухолей in vivo. Были получены данные, свидетельствующие о возможности обмена полимерными интактными молекулами РНК между клетками и о возможной сигнальной роли РНК в межклеточных взаимодействиях у высших растений. Исследование явления секреции нуклеиновых кислот клетками необходимо для понимания их биологической роли в организме, участия в процессах взаимодействия между клетками, взаимной регуляции функционирования и дифференцировки клеток, для разработки методов ранней диагностики и мониторинга некоторых опасных заболеваний.
При помощи метода гибридизации ДНК на метафазных хромосомах человека были исследованы образцы циркулирующей и связанной с клеточной поверхностью ДНК, выделенные из крови здоровых доноров и больных пациентов. На первом этапе проводили полногеномную амплификацию образцов ДНК при помощи полимеразной цепной реакции в присутствие частично вырожденного праймера (DOP-PCR). В ходе ПЦР в реакционную смесь был добавлен аналог дезоксиуридинтрифосфата, содержащий в своей структуре биотин. На следующем этапе проводили гибридизацию полученных ДНК-зондов с метафазными хромосомами человека, препараты которых были получены из перефирических лимфоцитов. В результате проделанной работы было показано, что внеклеточная ДНК из крови здоровых доноров и больных раком молочной железы гибридизуется практически со всеми хромосомами, в основном в центромерной области. Результаты проведенной работы соответствуют задачам, сформулированным в Техническом задании.
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники" на 2002-2006 годы

Программное мероприятие

1.11 Развитие системы стажировок молодых ученых и преподавателей в крупных научно-образовательных центрах (включая зарубежные) и участие в конференциях, симпозиумах, семинарах, школах (в том числе за рубежом)
Продолжительность работ
2005, 2 мес.
Бюджетные средства
0,42 млн
профинансировано
Тема
Выполнение научно-исследовательских, опытно-конструкторских и технологических работ молодыми учеными и преподавателями во время проведения стажировок в российских научно-образовательных центрах.
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
28,8 млн
Количество заявок
174
Тема
Выполнение научно-исследовательских, опытно-конструкторских и технологических работ молодыми учеными и преподавателями во время проведения стажировок в зарубежных научно-образовательных центрах.
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
17,6 млн
Количество заявок
42
Тема
Выполнение научно-исследовательских работ молодыми учеными и преподавателями во время проведения стажировок в зарубежных научно-образовательных центрах (в том числе с участием в конференциях, симпозиумах, семинарах, школах).
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
46 млн
Количество заявок
153
Тема
Разработка противовирусных нанокомпозитов диоксида титана с каталитически активными нуклеиновыми кислотами.
Продолжительность работ
2009 - 2010, 17 мес.
Бюджетные средства
7 млн
Количество заявок
1
Тема
Разработка метода выделения минорных популяций циркулирующих в крови эукариотических клеток (онкоспецифических и клеток плода), основанного на использовании линейки микроканальных кремниевых матриц в качестве прецизионных размер-селективных фильтров.
Продолжительность работ
2008 - 2009, 17 мес.
Бюджетные средства
7,8 млн
Количество заявок
2