Альтернатива антибиотикам – лизоцимы вирусов бактерий

В ходе выполнения научно-исследовательских работ сконструированы гибридные плазмиды, содержащие ген лизоцима бактериофага FMV в составе векторных плазмид для экспрессии в широком круге грамм-отрицательных бактерий, а также в векторах для внутриклеточного синтеза лизоцима в дрожжах и для секреции из дрожжевых клеток. Определён уровень экспрессии лизоцима в бактериальных и дрожжевых клетках.

В ходе выполнения научно-исследовательских работ сконструированы гибридные плазмиды, содержащие ген лизоцима бактериофага FMV в составе векторных плазмид для экспрессии в широком круге грамм-отрицательных бактерий, а также в векторах для внутриклеточного синтеза лизоцима в дрожжах и для секреции из дрожжевых клеток. Определён уровень экспрессии лизоцима в бактериальных и дрожжевых клетках.
В ходе выполнения работ по 2 этапу проекта было проведено сравнение эффективности различных способов экспрессии растворимого лизоцима фага FMV в двух дрожжевых системах. Для этого ген лизоцима был клонирован и экспрессирован в клетках S.cerevisiae и P.pastoris под контролем наиболее сильных и строго регулируемых промоторов GAL1 и AOX1, соответственно. Было показано, что в обоих системах экспрессии продукция лизоцима в виде секретируемого белка является гораздо более эффективной по сравнению с внутриклеточным накоплением. При этом клетки S.cerevisiae показали себя лучшими продуцентами белка по сравнению с P.pastoris. Разработан метод выделения и очистки соответствующего ферментоа. Оптимизированы условия культивирования рекомбинантных штаммов-продуцентов с использованием питательных сред различного состава и условий культивирования. Наработан и очищен до гомогеноого состояния образец лизоцима бактериофага FMV Pseudomonas aueruginosa с удельной активностью выше 800000 МЕ\мг белка. Показано, что лизоцим фага обладает высокой антибактериальной активностью в отношении синегнойной палочки. Разработанный метод очистки лизоцима из культуральной жидкости Saccharomyces cerevisiae дает высокий выход целевого фермента с высоким уровнем удельной активности, в 8-16 раз превышающем удельную активность лизоцима, выделенного и очищенного из белка куриных яиц.