Создание метода дифференциальной диагностики и генетического анализа наследственных заболеваний, вызывающих поражение печени у новорожденных детей, на основе молекулярного многопараметрического анализа.

Были подобраны олигонуклеотидные праймеры для последующей детекции мутаций и полиморфных вариантов гена GALT для проведения первого и второго раундов полимеразной цепной реакции.
  Для каждого из анализируемых фрагментов в отдельности были подобраны оптимальные условия амплификации. Для мультиплексной ПЦР был проведен подбор оптимального соотношения компонентов реакционной смеси, структуры программы амплификации.
На основе анализа пяти различных мутаций в гене галактозо-1-фосфат уридил трансферазы и пяти полиморфных вариантов данного гена и использования методов математического моделирования для подбора условий гибридизации был сконструирован биочип для детекции этих мутаций и полиморфных вариантов гена.

В результате выполнения данного этапа работы был создан биочип для детекции мутаций и полиморфных вариантов гена галактозо-1-фосфат уридил трансферазы.
Подобраны оптимальные олигонуклеотидные последовательности для детекции мутаций и полиморфных вариантов гена GALT на чипе.
Для каждого из анализируемых фрагментов были подобраны оптимальные условия гибридизации, проведен подбор оптимального соотношения компонентов реакционной смеси, температуры и времени гибридизации. Был проведен анализ ДНК детей больных галактоземией тип 1 с помощью методов ПДРФ и секвенирования.
У пациентов были выявлены различные мутации и полиморфизмы в гене галактозо-1-фосфат уридил трансферазы. ДНК этих пациентов была амплифицирована и получены зонды для детекции этих мутаций в гибридизации на биочипе и проведено тестирование.
  Были проведены патентные исследования по ГОСТ 15.011-96. Проведенные работы полностью соответствуют требованиям технического задания и календарного плана.

Проведены сиквенс и проверка амплифицированных фрагментов. Сконструирован микрочип для детекции мутаций и проведена оптимизация условий гибридизации на микрочипе.

Проведено испытание микрочипов в гибридизации с ДНК-зондами с известной структурой и с ДНК-зондами, полученными от больных детей. На тех же образцах ДНК проведен анализ методами ПДРФ и прямого секвенирования. Проведена оценка возможности создания конкурентноспособной продукции и услуг и разработаны рекомендации по использованию результатов проведенных НИР. Сформулированы технические требования для технического задания на разработку продукции.