Поиск селективных ингибиторов поли(ADP-рибоза)-полимеразы I человека и определение их биологических и фармакологических свойств

Проведен анализ научно-технической литературы.
  Разработана лабораторная методика синтеза соединений - потенциальных ингибиторов ПАРП-1 человека.
  Предложен удобный метод синтеза структурного элемента поли(ADP-рибозы) 2`-О-?-D-рибофуранозиладенозина.
  Разработана тест-система определения ингибиторных характеристик соединений.
  Проведено выделение рекомбинантной ПАРП-1 человека и с ее использованием проведена оценка ингибиторных свойств нескольких дисахаридных нуклеозидов .
  На основе литературных данных произведен отбор пяти культур трансформированных и нормальных клеток человека, пригодных для оценки эффективности противоопухолевого действия ингибиторов ПАРП-
  Проведены патентные исследования в соответствии с п.5.2. ТЗ.

Проведена наработка препаративных количеств ПАРП-1 и р24 – ее ДНК-связывающего фрагмента, а также ключевых белков ЭРО – АРЕ1 и ДНК-полимеразы бета.
  Разработана схема выделения регуляторного белка ЭРО – HMGB1 и проведена препаративная наработка этого белка из тимуса теленка.
Методом молекулярного докинга проведена валидация адекватности полноатомной модели ПАРП-1, созданной на первом этапе выполнения НИР
  Проведен синтез 2`-О-альфа-D-рибофуранозилуридина, проведена характеризация полученного продукта методами ЯМР, УФ- и Масс -спектроскопии. Чистота препарата соответствует требованиям ТЗ.
  Выбраны и апробированы методы оценки цитотоксичности исследуемых соединений, показана их пригодность и оценена чувствительность.

Проведена коррекция модели центра связывания с помощью опции ковалентного докинга программы Lead Finder и осуществлена дополнительная оптимизация структуры методом неограниченной молекулярной динамики в явно заданной водной среде.

Осуществлен синтез соединений, потенциальных ингибиторов ПАРП-1, выбранных на основе данных моделирования. Исследовано влияние пяти новых ингибиторов ПАРП-1 человека на чувствительность опухолевых клеток человека к действию доксорубицина. Проведен скрининг клеточных линий на содержание ПАРП-1 белка с использованием химически активной ДНК фага М13. Отобраны линии, содержащие максимальное количество ПАРП-1, для последующего ингибирования эндогенной ПАРП-1 экстрактов новыми ингибиторами. Определено влияние ингибиторов ПАРП-1 на эффективность автомодификации эндогенной ПАРП-1 в клеточных экстрактах с использованием химически активной ДНК фага М13.