Молекулярные механизмы репрограммирования ядер соматических клеток человека как основа для разработки методов аутологичной клеточной терапии с использованием линий эмбриональных стволовых клеток

Проанализирована научно-техническая литература по теме исследования и проведен патентный поиск. Получены культуры эмбриональных фибробластов человека и проведена оценка их физиологического состояния, кариотипа, статуса метилирования импринтированных локусов генома при воздействии ингибиторами ДНК-метилтрансфераз и матричных процессов. Сформирован задел для анализа характера экспрессии генов плюрипотентности в системе in vitro при эпигенетическом репрограммировании генома. Разработан протокол экспозиции соматических клеток с ингибитором ДНК-метилтрансфераз для эпигенетического репрограммирования дифференцированных ядер с целью получения аутологичных линий эмбриональных стволовых клеток.

Изучено влияние хроматин-модифицирующих факторов на формирование плюрипотентности ядер дифференцированных клеток человека. Разработан протокол экспозиции соматических клеток с ингибиторами ДНК-метилтрансфераз и гистоновых деацетилаз для эпигенетического репрограммирования. С использованием данного протокола в культурах дифференцированных эмбриональных фибробластов достигнута реактивация экспрессии генов OCT4 и NANOG. Проведен анализ динамики апоптоза и физиологических параметров клеток, подвергаемых эпигенетическому репрограммированию. Разработаны принципы мониторинга эпигенетического статуса импринтированных локусов генома и хромосомной нестабильности при репрограммировании. Сформирован научно-технический задел в области клеточных технологий для получения аутологичных линий эмбриональных стволовых клеток и проведен патентный поиск.