Регистрация / Вход
Прислать материал

Получение и дифференциальное профилирование культур Т-регуляторных клеток человека, обладающих супрессорной активностью, индуцируемой раковыми или мезенхимальными стволовыми клетками

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Проект закончен

Работы должны соответствовать по предполагаемому исполнению лучшим мировым стандартам.
Создаваемый научно-технический задел должен обеспечивать в будущем проведение опытно-конструкторских и технологических работ на конкурентном уровне.
Результаты работ должны способствовать дальнейшему инновационному развитию российских технологий в данном приоритетном направлении Программы.

Соисполнители

Организация
ИБМХ

Этапы проекта

1
27.02.2007 - 31.05.2007
Целью первого этапа НИР явился поиск направления решения поставленной задачи, получение первичных культур раковых и мезенхимальных стволовых клеток и их фенотипический анализ. Для этой цели были проведены углубленный анализ литературы и патентный поиск. Кроме того, для определения оптимального пути решения поставленной задачи был проведен инструментальный анализ содержания Т-регуляторных (CD4+, CD25+) клеток у пациентов с различными формами рака. Было установлено наиболее высокое содержание этих клеток в крови пациентов с раком кишечника и почки. В связи с этим дальнейшие исследования будут сосредоточены на этих формах рака.
Проведен сбор клеточного материала от больных злокачественными опухолями. Определены фенотипические маркёры раковых и стволовых клеток, которые могут быть использованы для идентификации и разделения искомых популяций. Получены первичные клеточные культуры мезенхимальных стволовых и опухолевых клеток.
Полученные результаты будут использованы для проведения следующего этапа работ, а так же могут быть использованы для разработки клинических тестов, позволяющих прогнозировать течение онкологических заболеваний.
Развернуть
2
01.06.2007 - 30.09.2007
На отчетном этапе основные усилия были сосредоточены на получении Т-регуляторных клеток в культуре и их транскриптомном анализе. Т-лимфоциты с фенотипом CD4+ CD25- и CD4+ CD25+ были выделены из крови онкологических больных раком кишечника и раком почки. Регуляторная природа CD4+ CD25+ клеток была показана в экспериментах по выявлению экспрессии фактора транскрипции FoxP3 и маркера CD127, а также способности подавлять пролиферацию CD4+ CD25- клеток. Был разработан протокол индукции регуляторного фенотипа мезенхимальными стволовыми клетками. Образующиеся в культуре лимфоциты обладали высокой регуляторной активностью, но отличались от выделенных из крови Т-регуляторных клеток по секреции цитокинов и экспрессии FoxP3 и CD25. Из клеток, экспрессирующих регуляторный фенотип, была выделена РНК, которая затем была проанализирована на микрочипах фирмы Agilent для выявления профиля генной экспрессии.
Развернуть
3
01.10.2007 - 31.10.2007
На отчетном этапе были проанализированы данные по экспрессии генов в клетках культур с регуляторной активностью, полученных на предыдущем этапе. Для повышения уровня достоверности результатов на этом этапе также был выполнен эксперимент «Dye swap» при, котором, на одном микрочипе гибридизуется РНК контрольных и исследуемых клеток, содержащая различающиеся флуоресцентные метки.
Были определены гены, экспрессируемых преимущественно в CD4+ CD25+ клетках и выделена группа из 37 генов, уровень экспрессии которых более чем в два раза превышает таковой в клетках с Т-хелперным фенотипом. Анализ этой группы подтвердил наличие известных маркеров регуляторных клеток человека, таких как CTLA4, FOXP3, CD25, CCR7 а также TNFRSF1B. Кластеризация генов/протеинов при помощи биоинформационного ресурса DAVID (Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery) позволила определить их основные функциональные категории. Установлено, что в исследуемых клетках преимущественно синтезируются трансмембранные протеины, белки, регулирующие процессы пролиферации и запрограммированной смерти клеток (апоптоза).
Был выявлен также ряд генов, включая гены с неизвестной функцией ранее не ассоциировавшиеся с Т-регуляторным фенотипом. Для одного их таких генов (A_24_P938583) было установлено сходство с геном TDP43, продукт которого является клеточным регулятором, действующим на уровне связывания с ДНК.
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2013 годы"

Программное мероприятие

1.2 Проведение проблемно-ориентированных поисковых исследований и создание научно-технического задела по технологиям в области наук о жизни
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
4,5 млн
Организация
ИОГен РАН
профинансировано
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
3,21 млн
Организация
ИБГ УНЦ РАН
профинансировано
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем по критической технологии «Клеточные технологии»
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
40
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем по критической технологии «Биомедицинские и ветеринарные технологии жизнеобеспечения и защиты человека и животных»
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
136
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области индустрии наносистем и материалов по критической технологии «Нанотехнологии и наноматериалы» (мероприятие 1.3 Программы)
Продолжительность работ
2007 - 2008, 11 мес.
Бюджетные средства
16 млн
Количество заявок
72
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
48
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем по критической технологии «Геномные и посттеномные технологии создания лекарственных средств» (мероприятие 1.2 Программы)
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
43