Регистрация / Вход
Прислать материал

Суицидная генотерапия гормон-чувствительных опухолей человека: разработка невирусной системы направленного переноса гена тимидинкиназы вируса простого герпеса первого типа на основе аналогов люлиберина

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Проект закончен

Работы должны соответствовать по предполагаемому исполнению лучшим мировым стандартам.
Создаваемый научно-технический задел должен обеспечивать в будущем проведение опытно-конструкторских и технологических работ на конкурентном уровне.
Результаты работ должны способствовать дальнейшему инновационному развитию российских технологий в данном приоритетном направлении Программы.

Этапы проекта

1
27.02.2007 - 30.06.2007
В результате выполнения первого этапа работ синтезированы три пептида, представляющих собой аналоги люлиберина (GnRH). На их основе получены два молекулярных конъюгата, содержащих помимо лигандной части модифицированный сигнал ядерной локализации T-антигена вируса SV-40 (NLS). Кроме того, получены два меченых с помощью флюоресцеина пептида. Показано, что основным путем интернализации молекулярных конъюгатов на основе люлиберина является рецептор-опосредованный эндоцитоз. Изучены условия формирования комплексов исследуемых молекулярных конъюгатов с плазмидной ДНК, в частности, изучена стехиометрия комплексов и показан некооперативный характер взаимодействия ДНК с пептидами. В экспериментах на клетках гепатомы человека HepG2 показано, что комплексы ДНК с молекулярными конъюгатами на основе GnRH способны эффективно проникать в клетки и обеспечивать экспрессию перенесенных генов. Параллельно проводилось исследование факторов, влияющих на эффективность переноса ДНК в опухолевые клетки млекопитающих с помощью исследуемых молекулярных конъюгатов. Показано, что в отличие от ранее изученных комплексов ДНК с катионными пептидами K8 и TAT, избытки свободных пептидов не оказывают существенного влияния на эффективность проникновения комплексов ДНК/NLS-GnRH в клетки HepG2. Выявлено угнетающее действие компонентов сыворотки крови на процесс интернализации комплексов клетками HepG2. Данное обстоятельство может иметь решающее значение в дальнейших исследованиях, связанных с разработкой методов доставки комплексов ДНК/GnRH-NLS in vivo.
Таким образом, выполнены основные задачи первого этапа НИР – синтезированы молекулярные конъюгаты на основе аналогов люлиберина, изучены условия их комплексообразования с плазмидной ДНК, показано, что основным механизмом интернализации комплексов ДНК/GnRH-NLS является рецептор-опосредованный эндоцитоз и выявлены факторы, влияющие на эффективность переноса ДНК в клетки
Развернуть
2
01.07.2007 - 31.10.2007
В результате выполнения НИР синтезированы 4 пептида, представляющих собой аналоги люлиберина (GnRH). На их основе получены три молекулярных конъюгата, содержащих помимо лигандной части модифицированный сигнал ядерной локализации T-антигена вируса SV-40 (NLS). Кроме того, получены три меченых с помощью флюоресцеина пептида. Показано, что основным путем интернализации молекулярных конъюгатов на основе люлиберина является рецептор-опосредованный эндоцитоз. Изучены условия формирования комплексов исследуемых молекулярных конъюгатов с плазмидной ДНК, в частности, изучена стехиометрия комплексов и показан некооперативный характер взаимодействия ДНК с пептидами. В экспериментах на клетках гепатомы человека HepG2 показано, что комплексы ДНК с молекулярными конъюгатами на основе GnRH способны эффективно проникать в клетки и обеспечивать экспрессию перенесенных генов. Параллельно проводилось исследование факторов, влияющих на эффективность переноса ДНК в опухолевые клетки млекопитающих с помощью исследуемых молекулярных конъюгатов. Показано, что в отличие от ранее изученных комплексов ДНК с катионными пептидами K8 и TAT, избытки свободных пептидов не оказывают существенного влияния на эффективность проникновения комплексов ДНК/NLS-GnRH в клетки HepG2. Выявлено угнетающее действие компонентов сыворотки крови на процесс интернализации комплексов клетками HepG2. Данное обстоятельство может иметь решающее значение в дальнейших исследованиях, связанных с разработкой методов доставки комплексов ДНК/GnRH-NLS in vivo. Осуществлен перенос вектора экспрессии гена тимидин-киназы вируса HSV1 в клетки HepG2 с помощью двух синтезированных молекулярных конъюгатов. Последующая обработка трансфецированных клеток ацикловиром привела к апоптотической гибели более 90% клеток.
Таким образом, выполнены основные задачи НИР – синтезированы молекулярные конъюгаты на основе аналогов люлиберина, изучены условия их комплексообразования с плазмидной ДНК, показано, что основным механизмом интернализации комплексов ДНК/GnRH-NLS является рецептор-опосредованный эндоцитоз и выявлены факторы, влияющие на эффективность переноса ДНК в клетки с помощью исследуемых молекулярных конъюгатов. На основе полученных конъюгатов разработана эффективная система переноса генов в клетки гормон-чувствительных опухолей человека. Данная система успешно апробирована на модели «суицидной» генотерапии клеток гепатомы человека HepG2.
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2013 годы"

Программное мероприятие

1.2 Проведение проблемно-ориентированных поисковых исследований и создание научно-технического задела по технологиям в области наук о жизни
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
4,5 млн
Организация
ИОГен РАН
профинансировано
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем по критической технологии «Клеточные технологии»
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
40
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем по критической технологии «Биомедицинские и ветеринарные технологии жизнеобеспечения и защиты человека и животных»
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
136
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области индустрии наносистем и материалов по критической технологии «Нанотехнологии и наноматериалы» (мероприятие 1.3 Программы)
Продолжительность работ
2007 - 2008, 11 мес.
Бюджетные средства
16 млн
Количество заявок
72
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
48
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем по критической технологии «Геномные и посттеномные технологии создания лекарственных средств» (мероприятие 1.2 Программы)
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
43