Получение и совершенствование штаммов дрожжей Pichia pastoris – продуцентов высокоселективных лекарственных препаратов на основе альфа16-интерферона человека и химерного белка, состоящего из целевого белка и альбумина плазмы крови человека
Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Проект закончен
Проект
02.512.11.2079
Руководитель работ
Падкина Марина Владимировна
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
4,1 млн
Внебюджетные средства
0,4 млн
Работы должны проводиться в рамках критической технологии «Технологии биоинженерии». Работы должны соответствовать по предполагаемому исполнению лучшим мировым стандартам. Создаваемый научно-технический задел должен обеспечивать в будущем проведение опытно-конструкторских и технологических работ на конкурентном уровне. Результаты работ должны способствовать дальнейшему инновационному развитию российских технологий в данном приоритетном направлении Программы.
Соисполнители
Организация
ООО "Биотех"
Этапы проекта
1
27.02.2007 - 30.04.2007
Объектом исследования являлись штаммы дрожжей Pichia pastoris, синтезирующие альфа16 интерферон человека.
Цель работы заключалась в селекции спонтанно возникающих клонов интегрантов дрожжей Pichia pastoris, содержащих множественные встройки экспрессионной кассеты, что обеспечивает высокий и стабильный уровень продукции интерферона альфа 16 человека. В работе сознательно не применяли традиционный подход для получения мультикопийных интегрантов, заключающийся в использовании плазмид с генами устойчивости к антибиотикам и отборе трансформантов на средах с градиентом концентрации антибиотика.
В работе получены 2 клона дрожжей Pichia pastoris с повышенным уровнем синтеза и секреции интерферона альфа 16 человека по сравнению со штаммом, ранее защищенным патентом РФ.
Полученные штаммы дрожжей P. pastoris – продуценты рекомбинантного альфа16- интерферона могут быть использованы для производства рекомбинантных белков медицинского назначения в Центре малотоннажного производства медицинских биопрепаратов методами генной инженерии, включенного в Программу развития Петергофа как Наукограда РФ.
Цель работы заключалась в селекции спонтанно возникающих клонов интегрантов дрожжей Pichia pastoris, содержащих множественные встройки экспрессионной кассеты, что обеспечивает высокий и стабильный уровень продукции интерферона альфа 16 человека. В работе сознательно не применяли традиционный подход для получения мультикопийных интегрантов, заключающийся в использовании плазмид с генами устойчивости к антибиотикам и отборе трансформантов на средах с градиентом концентрации антибиотика.
В работе получены 2 клона дрожжей Pichia pastoris с повышенным уровнем синтеза и секреции интерферона альфа 16 человека по сравнению со штаммом, ранее защищенным патентом РФ.
Полученные штаммы дрожжей P. pastoris – продуценты рекомбинантного альфа16- интерферона могут быть использованы для производства рекомбинантных белков медицинского назначения в Центре малотоннажного производства медицинских биопрепаратов методами генной инженерии, включенного в Программу развития Петергофа как Наукограда РФ.
2
01.05.2007 - 31.07.2007
В процессе выполнения второго этапа, задачей которого являлось создание штаммов дрожжей P. pastoris - продуцентов химерного белка, состоящего из альфа16-интерферона и альбумина человека, впервые получено 30 клонов дрожжей P. pastoris с различным уровнем синтеза и секреции химерного белка, состоящего из целевого белка и альбумина человека. Полученные штаммы дрожжей P. pastoris – продуценты рекомбинантного химерного белка, состоящего из альфа16 интерферона и альбумина человека, могут быть использованы для производства рекомбинантных белков медицинского назначения.
3
01.08.2007 - 31.10.2007
В процессе выполнения научно-исследовательской работы проведена селекция штаммов дрожжей Pichia pastoris - продуцентов альфа16-интерферона человека и отобраны трансформанты, способные секретировать до 20-22 мг целевого продукта на литр культуральной среды, что на 40% превышает продуктивность штамма - прототипа.
При трансформации штамма дрожжей P. pastoris PS99 плазмидой pPIC9AbFN, обеспечивающей синтез химерного гетерологичного белка, состоящего из альбумина и альфа16-интерферона человека под контролем промотора гена АОХ1 дрожжей P. pastoris, были получены интегранты с различным уровнем синтеза и секреции химерного белка.
Отработана технология культивирования штаммов дрожжей – продуцентов альфа16-интерферона человека и химерного белка, состоящего из альбумина и альфа16-интерферона человека, разработана схема очистки рекомбинантных белков. Проведено определение биологической активности альфа16-интерферона человека и химерного белка, состоящего из альбумина и альфа16-интерферона человека, изучено влияние рН среды на стабильность и активность рекомбинантных белков. Проведены испытания рекомбинантного альфа16-интерферона человека на острую и хроническую токсичность.
При трансформации штамма дрожжей P. pastoris PS99 плазмидой pPIC9AbFN, обеспечивающей синтез химерного гетерологичного белка, состоящего из альбумина и альфа16-интерферона человека под контролем промотора гена АОХ1 дрожжей P. pastoris, были получены интегранты с различным уровнем синтеза и секреции химерного белка.
Отработана технология культивирования штаммов дрожжей – продуцентов альфа16-интерферона человека и химерного белка, состоящего из альбумина и альфа16-интерферона человека, разработана схема очистки рекомбинантных белков. Проведено определение биологической активности альфа16-интерферона человека и химерного белка, состоящего из альбумина и альфа16-интерферона человека, изучено влияние рН среды на стабильность и активность рекомбинантных белков. Проведены испытания рекомбинантного альфа16-интерферона человека на острую и хроническую токсичность.
Программа
Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2013 годы"
Программное мероприятие
1.2 Проведение проблемно-ориентированных поисковых исследований и создание научно-технического задела по технологиям в области наук о жизни
профинансировано
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
4,5 млн
Организация
Томский государственный университет, НИ ТГУ, ТГУ
профинансировано
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
4,5 млн
профинансировано
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
4,5 млн
профинансировано
профинансировано